К общим колиформным бактериям (ОКБ) относят аэробные и факультативноанаэробные не образующие спор грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре 37(+1)°С в течение 24-48 ч. Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) в дополнение к вышеперечисленному сбраживают лактозу до кислоты и газа при 44(±0,5) °С в течение 24 ч.

ОКБ и ТКБ определяют титрационным (бродильным) и мембранным методами. Арбитражным является метод мембранной фильтрации.

Титрационный (бродильный метод). Титрационный метод используют только при отсутствии материалов и оборудования, необходимых для выполнения анализов методом мембранной фильтрации, наличии в исследуемой воде большого количества взвешенных веществ, преобладании посторонней микрофлоры, препятствующей получению на фильтрах изолированных колоний.

Метод основан на посеве строго определенных объемов анализируемой воды и подращивании при 37 °С в средах накопления с последующим высевом бактерий на плотную среду Эндо, дифференцировании выросших микроорганизмов и определении наиболее вероятного числа бактерий в 1 л воды по таблицам.

Каждый указанный объем воды помещают во флаконы или пробирки с лактозо-пептозной средой. Посев 100,0 и 10,0 мл воды производят во флаконы и пробирки соответственно с 10,0 и 1,0 мл концентрированной среды, посев 1,0 мл пробы — в пробирки с 10,0 мл среды нормальной концентрации. Посевы инкубируют 24 ч при 37(±1)°С. Если признаки роста (помутнение) и газообразования не наблюдаются, то посевы оставляют в термостате и окончательно просматривают через 48 ч.

Отсутствие помутнения и образования газа во флаконах и пробирках—свидетельство отрицательного результата, что позволяет закончить исследование.

Из каждого флакона или пробирки, в которых замечено помутнение и (или) газ, делают посев петлей на поверхность среды Эндо, разделенной на 3-4 сектора. Посевной материал следует брать с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Чашки инкубируют при 37(±1) °С в течение 18-20 ч. При отсутствии роста, а также при наличии колоний, не характерных для ОКБ (пленчатых, губчатых, с неровными краями и поверхностью, плесневых и др.), считают результат отрицательным.

Из выросших на среде Эндо красных, розовых, бледно-розовых колоний с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром и отпечатком на питательной среде (лактозоположительные колонии) делают мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать ОКБ и грамотрицательные бактерии семейства Pseudomonadaceae и других оксидазоположительных бактерий, обитающих в воде. С этой целью 2-3 изолированные колонии снимают с поверхности среды стеклянной палочкой, наносят штрихом на фильтрованную бумагу, смоченную раствором диметил-n-фенилендиамином (можно использовать готовые бумажные оксидазные диски).

При отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при положительном она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин.

Наличие грамотрицательных палочек в мазках и отрицательный оксидазный тест позволяют дать положительный ответ о наличии ОКБ при анализе воды.

При необходимости выявления БГКП грамотрицательные палочки, не образующие оксидазу, вновь исследуют в бродильном тесте, внося петлей посевной материал в полужидкий питательный агар с 0,5% глюкозы, и инкубируют при 37 °С в течение суток. Наличие кислоты и газа свидетельствует о положительном результате.

Для определения ТКБ делают посев 2-3 изолированных лактозоположительных колоний каждого типа из каждого сектора на среде Эндо в пробирки с любой из лактозных сред, нагретые до 44 °С. Немедленно после посева пробирки помещают в термостат и инкубируют при 44(±0,5) °С в течение 24 ч (предварительную оценку посевов можно проводить через 4-6 ч). Образование кислоты и газа в посевах указывает на наличие ТКБ.

Для ускорения выдачи ответа при анализе на присутствие ТКБ можно посеять 1 мл из среды накопления, в которой отмечено помутнение и газообразование, в пробирку с подогретой до 44 °С лактозопептонной средой. Посевы культивируют при температуре 44(±0,5) °С в течение 24 ч. При обнаружении кислоты и газа дают положительный ответ.

Если при проведении качественного анализа питьевой воды ОКБ или ТКБ обнаружены хотя бы в одном из трех объемов, то выдается ответ об обнаружении этих микроорганизмов в 100 мл.

При количественном анализе определяют наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ в питьевой воде и воде открытых водоемов.

Часто результат анализа выражают в виде коли-индекса или коли-титра. Коли-титр — минимальное количество воды (в мл), в котором обнаруживаются БГКП. Коли-индекс — количество БГКП, содержащихся в 1 л исследуемой воды (по международному и европейскому стандарту, в 100 мл). Величину коли-индекса определяют по таблицам ниже. Зная коли-индекс, рассчитывают коли-титр по формуле: коли-титр = 1000/коли-индексс.

- Читать далее "Метод мембранных фильтров определения общих и термотолерантных колиформных бактерий (ОКБ, ТКБ) воды"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.09.2019