К сульфитредуцирующим клостридиям относят анаэробные спорообразующие палочки, восстанавливающие сульфит натрия при росте на железосульфитном агаре при 44(±1)°С (в течение 16-18 ч образуют колонии черного цвета различной интенсивности окраски, имеющие форму двояковыпуклой линзы, комочка ваты или «самолетика»).

а) Подготовка проб для исследования. Перед посевом пробы воды, разлитые по 20 мл в пробирки, прогревают на водяной бане при 75(±5)°С в течение 15 мин. Это необходимо для исключения вегетативных форм. При исследовании хлорированной воды прогревания не производят.

б) Метод мембранных фильтров. Воду объемом 20 мл фильтруют через мембранный фильтр (техника фильтрования описана в отдельной статье). Затем фильтр при помощи фламбированного пинцета аккуратно складывают вдвое фильтрующей поверхностью внутрь. Такой согнутый в виде трубочки фильтр осторожно помещают в пробирку с горячим (70-80 °С) железосульфитным агаром. При этом фильтр расправляется и располагается по стенке пробирки.

Для создания анаэробных условий засеянную таким образом пробирку быстро охлаждают в холодной воде. Посевы инкубируют при 44(±1)°С в течение 16-18 ч.

Можно произвести посев и по-другому. Для этого чашки Петри (диаметр 55-60 мм) заливают тонким слоем железосульфитного агара. После застывания среды на нее помещают фильтр фильтрующей поверхностью вниз так, чтобы под ним не было пузырьков воздуха. Затем горячий железосульфитный агар доливают до верхнего края крышки так, чтобы последняя плотно прилегала к среде. Посевы также инкубируют при 44(±1) °С в течение 16-18 ч.

в) Метод прямого посева. Пробу воды разливают в две стерильные пробирки по 10 мл (если используют пробирки объемом не менее 30 мл) или в четыре пробирки по 5 мл (при использовании пробирок объемом 20 мл). Пробирки по стенке заливают горячим железосульфитным агаром, избегая образования пузырьков воздуха, причем объем среды должен превышать объем воды в 2 раза. Далее пробирки быстро охлаждают в воде. Посевы культивируют при 44(±1)°С в течение 16-18 ч.

г) Учет результатов. Подсчитывают черные колонии, выросшие на фильтрах и в толще среды. В мазках, приготовленных из материала таких колоний, сульфитредуцирующие клостридии имеют вид характерных грамположительных палочек. Результат анализа выражают числом КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.

- Читать далее "Определение энтерококков в воде"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.09.2019