Реакции с использованием свидетелей: ИФА, РИА
а) Иммуноферментный анализ (ИФА) — это иммунологическая реакция специфического взаимодействия антигена и антитела, в которой в качестве индикатора используются молекулы фермента (пероксидазы хрена, щелочной фосфатазы и др.). Способность маркерного фермента расщеплять субстрат — ортофенилендиамин для пероксидазы хрена или паранитрофенилфосфат для щелочной фосфатазы приводит к изменению цвета реактивной среды, что и лежит в основе этого теста.
Эти ферменты обладают уникальным свойством модифицировать одновременно большое количество молекул субстрата, что приводит к усилению чувствительности иммунологической реакции. Маркерным ферментом могут быть помечены антимикробные или антивидовые антитела, что предполагает использование разных методик проведения анализа: твердофазный ИФА, сэндвич-метод ИФА и др. Компоненты иммунного комплекса выявляются при помощи спектрофотометра, измеряющего поглощение света с определенной длиной волны.
б) Радиоиммунологический анализ (РИА) основан на выявлении иммунных комплексов при помощи радиоактивной метки, введенной в состав одного из компонентов реакции — антигена или антитела. Для приготовления конъюгатов антител или антигенов с радиоактивными изотопами наиболее широко используется радиоактивный йод (125I или 131I).
РИА является качественным и количественным методом определения одного из участников иммунного комплекса. Количественное определение проводится при помощи счетчиков радиоактивности. Разработано несколько методик проведения РИА, но наиболее доступным и демонстративным является твердофазный радиоиммунологический анализ. Его проведение возможно в разных вариантах: метод «простого сэндвича», «двойной сэндвич», модифицированный «двойной сэндвич» и др. При проведении этих тестов роль твердой фазы выполняют плоские пластины адсорбента, лунки полистирольных планшетов, крупные по размерам частицы.
Антиген или антитело, а в последующем и весь иммунный комплекс, который образуется в ходе проведения теста, изначально адсорбируется или ковалентно иммобилизуется на твердой фазе. РИА используется с целью выявления антигенов микроорганизмов, иммуноглобулинов, гормонов, ферментов и др. Он считается одним из наиболее чувствительных иммунохимических методов и позволяет обнаружить 0,1-10 нг белка в пробе.
- Читать далее "Приготовление растворов и реактивов для иммунологических исследований"
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 19.08.2019
- Методика проведения реакции двойной радиальной иммунодиффузии по Оухтерлони (О. Ouchterlony, 1948)
- Методика проведения простой (одиночной) радиальной иммунодиффузии по Манчини
- Методика проведения реакции лизиса
- Методика проведения реакции связывания комплемента (РСК)
- Методика проведения реакции иммунофлюоресценции (РИФ)
- Реакции с использованием свидетелей: ИФА, РИА
- Приготовление растворов и реактивов для иммунологических исследований
- Диагностические препараты для диагностики бактериальных инфекций и идентификации возбудителей
- История развития иммунопрофилактики
- Классификация вакцин и их характеристика