Реакции с использованием свидетелей: ИФА, РИА

а) Иммуноферментный анализ (ИФА) — это иммунологическая реакция специфического взаимодействия антигена и антитела, в которой в качестве индикатора используются молекулы фермента (пероксидазы хрена, щелочной фосфатазы и др.). Способность маркерного фермента расщеплять субстрат — ортофенилендиамин для пероксидазы хрена или паранитрофенилфосфат для щелочной фосфатазы приводит к изменению цвета реактивной среды, что и лежит в основе этого теста.

Эти ферменты обладают уникальным свойством модифицировать одновременно большое количество молекул субстрата, что приводит к усилению чувствительности иммунологической реакции. Маркерным ферментом могут быть помечены антимикробные или антивидовые антитела, что предполагает использование разных методик проведения анализа: твердофазный ИФА, сэндвич-метод ИФА и др. Компоненты иммунного комплекса выявляются при помощи спектрофотометра, измеряющего поглощение света с определенной длиной волны.

б) Радиоиммунологический анализ (РИА) основан на выявлении иммунных комплексов при помощи радиоактивной метки, введенной в состав одного из компонентов реакции — антигена или антитела. Для приготовления конъюгатов антител или антигенов с радиоактивными изотопами наиболее широко используется радиоактивный йод (125I или 131I).

РИА является качественным и количественным методом определения одного из участников иммунного комплекса. Количественное определение проводится при помощи счетчиков радиоактивности. Разработано несколько методик проведения РИА, но наиболее доступным и демонстративным является твердофазный радиоиммунологический анализ. Его проведение возможно в разных вариантах: метод «простого сэндвича», «двойной сэндвич», модифицированный «двойной сэндвич» и др. При проведении этих тестов роль твердой фазы выполняют плоские пластины адсорбента, лунки полистирольных планшетов, крупные по размерам частицы.

Антиген или антитело, а в последующем и весь иммунный комплекс, который образуется в ходе проведения теста, изначально адсорбируется или ковалентно иммобилизуется на твердой фазе. РИА используется с целью выявления антигенов микроорганизмов, иммуноглобулинов, гормонов, ферментов и др. Он считается одним из наиболее чувствительных иммунохимических методов и позволяет обнаружить 0,1-10 нг белка в пробе.

Реакции с использованием свидетелей: ИФА, РИА

- Читать далее "Приготовление растворов и реактивов для иммунологических исследований"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 19.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.