Методика количественного исследования анаэробной (неклостридиальной) инфекции

а) Количественное разведение в жидкой питательной среде. Применяют гиогликолевую среду, сердечно-мозговой бульон с 0,5% глюкозы или среду АС. Готовят разведения исходного объема материала в 10, 100, 1000 и т. д. раз, а затем выполняют посев на отдельные чашки Петри в количестве 0,1 мл и равномерно распределяют стеклянным шпателем или тампоном по всей поверхности агаровой среды (посев «сплошной газон»).

б) Количественное распределение на плотной питательной среде в чашке Петри по J. Gold (1965) в модификации В. Г. Мельникова и В. Н. Царева (1992).

Последняя методика предполагает предварительную обработку материала, содержащего биопленку, с помощью ультразвука (5 мин., 60 кГц). Данная модификация позволяет лучше разделить и распределить микробные клетки, находящиеся в виде конгломератов в составе биопленки, особенно, зубной бляшки.

Для достижения этой цели чашку Петри с 5 %-ым кровяным гемин-агаром условно делят на 3 сектора. Посев в 1-й сектор осуществляют одной поверхностью тампона, тщательно растирая материал по поверхности агаровой среды от края к середине чашки Петри и обратно. Затем стерильной стандартной бактериологической петлей выполняют 3 штриха, на основе которых формируют сектор 2. Далее материал тщательно распределяют по поверхности агаровой среды с помощью той же петли в направлении, перпендикулярном линиям посева от края ближайшего к предыдущему сектору в направлении края чашки Петри и обратно. Затем петлю прожигают и выполняют из сектора 2 еще три штриха, на основе которых аналогично формируют сектор 3.

При оценке результатов количественного исследования используют формулу:

N = 2 х n х k,

где n — число колоний микроорганизмов в последнем секторе, на котором отмечен рост; k — множитель, равный 102-104-106 КОЕ соответственно для секторов 1, 2 и 3.

Дальнейшее культивирование микроорганизмов осуществляют в анаэробных условиях до 7 суток при температуре 37°С. Для создания анаэробиоза используют микроанаэростаты или анаэробные камеры при большом потоке исследований, в которых атмосферный воздух с помощью вакуум-насоса замещается газовой смесью, состоящей из 80% азота, 10% углекислого газа и 10% водорода. Допустимым в условиях практических лабораторий является применение однокомпонентных газовых смесей, например из углекислого газа или инертных газов (аргона, неона и др.).

Для ликвидации остаточного кислорода применяют палладиевые катализаторы и газ-пакеты с химическими поглотителями (пирогаллол, тиосульфат). Следует подчеркнуть, что качественная «прокачка» анаэростата бескислородной газовой смесью с помощью вакуум-насоса 2-3 раза надежно защищает посевы микробных культур от избытка кислорода.

В практической работе (при отсутствии вакуум-насосов и баллонов с газовыми смесями) допустимо применение микроанаэростатов с газ-пакетами, содержащими пирогаллол и другие химические поглотители кислорода. В этих случаях особенно важно проводить индикацию анаэробиоза, для чего обычно применяют индикатор резазурин.

Для получения чистых культур облигатно-анаэробных и микроаэрофильных бактерий в анаэробных условиях используют 5%-й кровяной гемин-агар, приготовленный на основе сердечно-мозгового бульона. В качестве стимуляторов роста анаэробных микробов к кровяному агару добавляют гемин (5 мг/л) или гемоглобин, а также производное витамина К - менадион (0,1 мг/л).

- Читать далее "Этапы выделения и идентификации предполагаемых возбудителей анаэробной (неклостридиальной) инфекции"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.4.2020

Оглавление темы "Возбудители анаэробной (неклостридиальной) инфекции.":
  1. Род бактерий Fusobacterium (сем. Fusobacteriaceae)
  2. Род бактерий Leptotrichia (сем. Fusobacteriaceae)
  3. Род бактерий Eikenella (Eikenella corrodens)
  4. Извитые формы грамотрицательных анаэробных жгутиковых бактерий (сем. Acidaminococcaceae, Campylobacteriaceae, Helycobacteriaceae, Lachnospiriceaea, Succinivibrionaceae, Desulfovibrionaceae)
  5. Извитые формы грамотрицательных анаэробных спирохет (сем. Spirochaetaceae)
  6. Патогенез и клиника анаэробной (неклостридиальной) инфекции
  7. Взятие материала для диагностики анаэробной (неклостридиальной) инфекции
  8. Методика количественного исследования анаэробной (неклостридиальной) инфекции
  9. Этапы выделения и идентификации предполагаемых возбудителей анаэробной (неклостридиальной) инфекции
  10. Чувствительность к антибиотикам анаэробных бактерий и ее определение
  11. Заключение об этиологической значимости выделенных штаммов анаэробных бактерий

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.