Т. pallidum подвид pallidum относится к немногим возбудителям болезней человека, которые не могут быть культивированы in vitro в течение длительного времени. Ограниченный рост трепонем был получен на монослое тканевых культур эпителиальных клеток американского кролика Sf1Ep в микроаэробных условиях (O₂ — 1,5%) при температуре 34-35°С. В этих опытах было подтверждено, что цикл размножения трепонемы составляет 30-33 ч.

Для размножения трепонем, приготовления антигена бледной трепонемы, а также экспериментальных исследований используются биологические модели сифилитической инфекции на различных животных: обезьянах, кроликах, морских свинках и некоторых других. Наиболее удобным с экономической точки зрения и изученным животным, которым пользуются исследователи во всем мире, является кролик. С целью стандартизации получаемых исследований используется лабораторный патогенный штамм Никольса. Наилучшими способами заражения кролика считаются заражение в яичко, а также в кожу мошонки или спины.

Для поддержания штамма трепонем необходимо постоянно производить перевивку сифилитической инфекции, чтобы получить специфический орхит у кролика. В стерильных условиях в одно яичко кролика вводят по 1 мл взвеси, содержащей не менее 50 трепонем в каждом темном поле зрения микроскопа при использовании окуляра 7х и объектива 40х. Для подсчета этого показателя на предметное стекло микропипеткой наносят 0,01 мл взвеси, накрывают покровным стеклом и подсчитывают среднее число трепонем на поле зрения.

Обычно это среднее значение на 25-30 полей зрения. При инокуляции взвеси трепонем в яичко через 5-7 дней наблюдается развитие шанкра. Ранний орхит имеет вид округлого образования деревянистой плотности, пораженная ткань яичка — вид прозрачной стекловидной массы. После отделения пораженной ткани (шанкра) от яичка ее измельчают на 10-12 кусочков и помещают в колбу с 5 мл физиологического раствора комнатной температуры. После нескольких встряхиваний колбы каплю взвеси исследуют в темном поле на наличие бледных трепонем.

При наличии трепонем кусочки яичка вместе с физиологическим раствором переносят во флакон емкостью 50 мл и устанавливают на встряхивающий аппарат (шейкер) для вымывания микроорганизмов из ткани яичка. Процедура встряхивания продолжается около 1 ч, после чего содержимое флакона переносят в стерильную центрифужную пробирку и центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для осаждения эритроцитов и кусочков тканей яичка. Надосадочную жидкость отделяют в другую стерильную пробирку, после чего оценивают содержание трепонем во взвеси и при соответствующих показателях тут же используют для прививки сифилитической инфекции следующему животному. С целью сохранения культивируемого штамма бледные трепонемы пассируются еженедельно. Оставшуюся часть взвеси используют для проведения различных исследований.

Для образования шанкра на коже спины или мошонки 0,2 мл взвеси трепонем вводят внутрикожно, при этом шанкр образуется через 21 день. Шанкр на коже представляет собой язву округлой формы диаметром до 1 см и более. В центре язвы наблюдается некроз тканей, сверху образуется кровянисто-серозная корка. Для получения взвеси трепонем из кожного шанкра его тщательно очищают от корок и некротических масс, разрезают на кусочки и растирают в стерильной фарфоровой ступке, куда затем добавляют физиологический раствор и в соответствующей посуде смесь помещают на встряхивающий аппарат. В дальнейшем действия те же, что и при обработке шанкра яичка. По другой методике заражение кроликов производится путем введения в подкожные карманы кусочков сифиломы.

У большинства зараженных животных возникновение и развитие твердого шанкра является единственным проявлением инфекции, и после образования рубца других проявлений сифилиса обычно не бывает. В случаях дальнейшего развития инфекции через 1,5-2 мес. после появления твердого шанкра могут возникнуть так называемые генерализованные проявления, включающие одновременно признаки вторичного и позднего периодов сифилиса у человека: папулы, розеолы, паренхиматозный кератит, изменения костей, печени и сердечно-сосудистой системы. Поражений нервной системы, сходных с таковыми у человека, при экспериментальном сифилисе у животных получить не удалось.

- Читать далее "Клиника и патогенез сифилиса"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 5.2.2020