Серологическая диагностика возбудителя чумы (Y. pestis)

Подготовка проб. Для постановки серологических реакций кровь (1-5 мл) берут из локтевой вены, а при отсутствии такой возможности — из пальца. В этом случае титры антител в 2-4 раза и более будут ниже, чем при заборе из вены и постановке серологических реакций макрометодом. Кровь из пальца берут в объеме 0,4 мл и вносят в стерильный пенициллиновый флакон или пробирку с 1,6 мл 0,9%-ным раствора хлорида натрия (создается разведение 1:5).

После свертывания крови сгусток отслаивают от стенки пробирки стерильной стеклянной палочкой или платиновой петлей. Пробы сохраняют в холодильнике или транспортируют в лабораторию охлажденными (в сумке-холодильнике, термосе и т.п.). В лаборатории сыворотку обеззараживают при температуре 56,0±0,5°С в течение 30 мин, предварительно добавив мертиолят натрия в конечной концентрации 1:10 000.

Сыворотки людей перед постановкой РНГА и РНАг адсорбируют 50%-ной взвесью формалинизированных эритроцитов барана из расчета не менее 0,1-0,15мл на 1 мл исследуемой сыворотки. При отсутствии возможности исследовать сыворотку немедленно ее сохраняют в ампулах при температуре 4,0±0,5°С.

Выявление специфических иммуноглобулинов к капсульному антигену FI возбудителя чумы. Выбор оптимальной реакции и схем исследования сывороток людей на чуму зависит от целей и задач обследования больных, переболевших, контактировавших с ними. Специфические иммуноглобулины к фракции I возбудителя чумы можно выявить путем постановки как двухкомпонентной реакции непрямой гемагглюгинации (РИГА) с использованием антигенного чумного эритроцитарного диагностикума, так и трехкомпонентной реакции нейтрализации антигена (РНАг) с иммуноглобулиновым чумным диагности кумом.

а) Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) предназначена для выявления полных антител в сыворотке крови. Это достаточно специфичная и чувствительная двухкомпонентная реакция. Агглютинины в крови больных выявляются с 16-18-го дня болезни в титрах 1:20-1:40 и достигают максимальных титров 1:320-1:640 и более к 24-26-му дню. Диагностическими считаются гитры агглютинации в разведении не менее 1:20 и выше или 4-кратное нарастание титров антител в парных сыворотках.

Реакция ставится макро- и микрометодом.

Для подтверждения специфичности РНГА ставят реакцию торможения гемагглютинации (РТНГА). Если в РТНГА ряд с положительной гемагглютинацией на 2-3 лунки короче, чем в РИГА, то реакция специфична.

б) Реакция нейтрализации антигена (РНАг) служит для выявления антител в сыворотке крови с использованием диагностикума эритроцитарного чумного иммуноглобулинового. РНАг — высокоспецифическая трех компонентная реакция. Ее принцип заключается в специфической нейтрализации добавляемого капсульного антигена чумного микроба полными и неполными антителами, содержащимися в сыворотке.

В этой реакции агглютинины в крови больных выявляются с 10-12-го дня болезнивтитрах 1:20— 1:40 и достигают максимальных значений 1:320 и выше к 21-26-му дню. Диагностическими считаются титры агглютинации в разведении не менее 1:20 и выше или 4-кратное нарастание титров антител в парных сыворотках.

Реакция также ставится макро- и микрометодом.

Повышение достоверности результата достигается при одновременном выявлении так называемых полных и неполных антител в системе РИГА — РНАг.

При использовании системы однонаправленных реакций РИГА и РНАг отпадает необходимость в постановке контроля специфичности с каждой исследуемой сывороткой, так как эти две реакции, направленные на выявление агглютининов, взаимно контролируют полученные результаты. Специального анализа и оценки требуют случаи с положительным результатом в РНАг и отрицательным в РНГА. В этом случае целесообразно исследование парных сывороток. Антигенный диагностикум и набор ингредиентов для постановки РНГА/РНАт выпускает Институт микробиологии МО (г. Киров). Реакции ставят и учитывают в соответствии с прилагаемым наставлением.

См. также схему микробиологического исследования ниже.

Микробиологическая диагностика возбудителя чумы (Y. pestis)

- Читать далее "Лечение и профилактика чумы"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 6.1.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.