а) Среда АГВ, сухая, коммерческая (Среда З.М. Андреевой, Н.И. Гивенталя, Н.И. Гридневой, Е.А. Ведьминой).

Состав, г/л:
Гидролизат кильки панкреатической или
Лизат кормовых дрожжей, осветленный ферментами — 20,0
Крахмал водорастворимый — 5,0
Натрия хлорид — 10,0
Натрия гидроортофосфат — 1,0
Агар микробиологический — 13,5
pH 7,4±0,2

Навеску препарата, указанную на этикетке, помещают в 1000,0 мл дистиллированной воды, доводят до кипения, кипятят 2-3 мин до полного расплавления агара, фильтруют. Устанавливают pH при необходимости. Стерилизуют при 121°С в течение 20 мин. Горячую среду разливают по 20,0 мл в стерильные чашки Петри. После застывания среду подсушивают при температуре 37°С в течение 50-60 мин, соблюдая правила асептики. Готовую среду можно использовать в течение 6 дней при условии хранения ее при температуре 4-8°С.

При определении чувствительности к антибиотикам гемоглобинофильных микроорганизмов перед розливом в чашки к среде добавляют 5% стерильной дефибринированной крови животных или человека.

б) Среды Мюллера-Хинтона. Плотная и жидкая среды широко применяются для определения чувствительности к антибиотикам и сульфаниламидам с использованием качественного и полуколичественного методов.

Исследуемую культуру инокулируют на поверхность подсушенной плотной среды, а затем накладывают диск с антибиотиками. Результаты реакции определяют по регистрации зоны отсутствия микробного роста вокруг дисков с антибиотиками после 18-20 ч инкубации в термостате при оптимальной для роста микроорганизма температуре.

Полуколичественный метод Ericsson, Bauer и соавт. (1966) заключается в использовании дисков, помещенных на стандартизированные среды известного объема и глубины в чашке Петри. Инокуляты тщательно отмеривают и засевают на поверхность среды. После удаления избытка жидкости диски с антибиотиками помещают на среду.

После инкубации в термостате размеры зон ингибиции роста микробов сравнивают со стандартными графиками, полученными при тестировании большого числа микроорганизмов. Результаты могут быть выражены в понятиях «чувствительность»/«резистентность» или в виде величины минимальной ингибирующей концентрации (МИК).

в) Агар Мюллера-Хинтона, HiMedia, Mueller-Hinton Agar. Среда принята комитетом ВОЗ как стандарт для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

Состав, г/л:
Вытяжка из говядины — 300,0
Гидролизат казеина кислотный — 17,5
Крахмал — 1,5
Агар - 17,0
pH 7,3±0,2

Суспендируют 38,0 сухой смеси в 1000,0 мл дистиллированной воды. Кипятят до полного растворения. Устанавливают pH. Стерилизуют автоклавированием при 121°С в течение 15 мин.

Среда поддерживает рост многих микроорганизмов. Крахмал служит «защитным коллоидом» против токсичных веществ, вырабатываемых в процессе роста.

На среде с добавлением сыворотки или крови успешно растут гонококки и менингококки.

г) Бульон Мюллера-Хинтона, HiMedia, Mueller-Hinton Broth. Бульон Мюллера-Хинтона используют для определения чувствительности бактерий к антимикробным препаратам и минимальных ингибирующих концентраций (МИК) антибактериальных веществ методом серийных разведений препарата в бульоне.

Состав, г/л:
Вытяжка из говядины — 300,0
Гидролизат казеина кислотный — 17,5
Крахмал растворимый — 1,5
pH 7,4±0,2

Суспендируют 21,0 г сухой смеси в 1000,0 мл дистиллированной воды. Нагревают до полного растворения. Устанавливают pH. Стерилизуют при 12 ГС в течение 15 мин.

После добавления «шоколадной» крови среду используют для определения чувствительности к антибиотикам менингококков.

Культуральные характеристики учитывают через 18-24 ч после инкубации при 37°С.

д) Диагностический агар для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (Агар ДОЧ), HiMedia, Diagnostic Sensitivity Test Agar. Диагностический агар рекомендован ВОЗ для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и химиопрепаратам, таким как сульфаниламиды.

Состав, г/л:
Пептон протеазный — 10,0
Вытяжка из телятины — 10,0
Декстроза — 2,0
Натрия хлорид — 3,0
Натрия фосфат двузамещенный — 2,0
Натрия ацетат — 1,0
Аденина сульфат — 0,01
Гуанина гидрохлорид — 0,01
Урацил — 0,01
Ксантин — 0,01
Агар — 15,0
Аневрин — 0,00002
pH 7,4±0,2

Суспендируют 43,0 г коммерческой среды в 1000,0 мл дистиллированной воды. Нагревают до полного растворения, стерилизуют при 121°С 15 мин.

Для приготовления кровяного агара охлаждают среду до 50°С и асептически добавляют 7% стерильной крови. Хорошо перемешивают легкими вращательными движениями и разливают в чашки.

Микроорганизмы дают на среде хорошо выраженный рост, обусловленный отсутствием веществ, ингибирующих его. Для менее требовательных микроорганизмов, таких как микрококки, сальмонеллы, шигеллы и протеи, агар можно использовать без крови. Для более требовательных микробов, таких как Н. influenzae, N. meningitidis, α- и β-гемолитические стрептококки, обязательно обогащение кровью.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам проводят следующим образом: поверхность среды засевают стерильным тампоном с бульонной культурой тест-микроба. Диски с антибиотиками накладывают на равном расстоянии друг от друга на подсушенную засеянную среду и инкубируют при 37°С 18 ч. Отмечают и регистрируют зоны задержки роста.

- Читать далее "Среды, реактивы для исследования физиологических и биохимических свойств микроорганизмов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 25.2.2020