Для культивирования микроорганизмов применяются питательные среды как приготовленные из различных компонентов в лаборатории, так и готовые коммерческие (готовятся по прописи на этикетке) отечественного и импортного производства. Каждая среда должна сопровождаться заключением о ее качестве, инструкцией по применению, а на импортные среды должен быть документ о внесении их в государственный реестр.

Рецепт 1. Пептонно-солевой раствор для приготовления разведений пищевых продуктов. 8,5 г хлористого натрия и 1 г пептона растворяют в 1 дм³ дистиллированной воды при медленном нагревании. Полученный раствор при необходимости фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают pH 7,0(±0,1) и стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 30 мин. Раствор хранят в темном месте при температуре 4(±2) °С в условиях, исключающих испарение влаги, не более 30 дней.

При использовании температура пептонно-солевого раствора должна соответствовать температуре анализируемого продукта.

Рецепт 2. Пептонная вода. Пептонную воду готовят так же, как и пептонно-солевой раствор, но без добавления хлористого натрия.

Рецепт 3. Водный агар (голодный агар). В колбу вместимостью 2000 см³ вносят 15 г агар-агара, добавляют 1000 см³ дистиллированной воды и растворяют при нагревании. Среду стерилизуют в автоклаве при 121(±1)°С в течение 20 мин.

Голодный агар применяют для наслаивания на застывшую засеянную питательную среду с целью предотвращения роста бактерий, образующих на поверхности плотных сред сплошной налет.

Рецепт 4. Мясная вода, мясопептонный бульон. Для приготовления мясной воды мясо освобождают от костей, жира и сухожилий, мелко нарезают или пропускают через мясорубку. 500 г полученного мясного фарша заливают 1 л водопроводной воды и оставляют для экстракции при комнатной температуре на 12 ч, или в термостате при 30 °С на 6 ч, или при температуре 37-39 °С на 2 ч, а при 50 °С — на 1 ч. За это время из мяса экстрагируются различные вещества, в том числе водорастворимые витамины. Затем мясо отжимают через марлю и полученный настой кипятят 30 мин.

При этом свертываются белки. Остывшую массу фильтруют через ватный фильтр и доливают водой до первоначального объема. Для получения мясопептонного бульона к полученной мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% NaCl и стерилизуют в автоклаве при 121 (± 1) °С в течение 20-30 мин.

Рецепт 5. Дрожжевой автолизат. Для приготовления дрожжевого автолизата следует выбирать емкость с таким расчетом, чтобы автолизат занимал около 1/5 объема посуды. 40 г свежих прессованных дрожжей (или 10 г сухих дрожжей) разводят в 100 мл воды, добавляют несколько кристаллов тимола или 1-2 мл хлороформа. Смесь выдерживают в термостате при 50-55 °С трое суток. По мере разжижения дрожжей смесь 1-2 раза в сутки встряхивают для равномерного прогревания.

За это время клетки дрожжей отмирают, а ферменты остаются активными и гидролизуют белки, а также другие биополимеры. Конец автолиза характеризуется полным разжижением дрожжей. Автолизат должен иметь коричневый оттенок и приятный запах. Полученный автолизат хорошо перемешивают и кипятят 20 мин на слабом огне (для свертывания нерасщепившихся белков и лучшего фильтрования), а затем фильтруют через бумажный фильтр.

Автолизат стерилизуют при 112(±1)°С 15 мин и сохраняют в холодильнике.

Рецепт 6. Дрожжевой экстракт. Прессованные хлебные дрожжи, лучше кормовые, в количестве 1 кг размельчают и размешивают в 825 см³ дистиллированной воды. Взвесь нагревают до 90-92 °С и сразу же фильтруют через складчатый бумажный фильтр (или центрифугируют). Фильтрат либо центрифугат стерилизуют, пропуская через фильтр Зейтца или свечи. Для проверки стерильности 2-3 см³ дрожжевого экстракта засевают в 10 см³ мясопептонного бульона и выдерживают 3 сут. при 20-30 °С. Дрожжевой экстракт необходимо хранить в холодном месте при 5-7 °С. Срок хранения — до 12 месяцев. Дрожжевой экстракт выпускается в сухом виде.

Рецепт 7. Цельное и обезжиренное стерильное молоко. Молоко нагревают до кипения, наливают в цилиндры и ставят на 10 — 20 ч в холодильник. По истечении этого времени сливают сливки, разливают частично обезжиренное таким образом молоко по пробиркам, закрывают их ватными пробками и стерилизуют при 112(±1) °С 30 мин.

Обезжиренное молоко можно получить путем центрифугирования (15 мин при 700-1500 g) или кипячения с последующим отстаиванием в холодильнике в течение двух дней.

- Читать далее "Дифференциально диагностические среды для некоторых грамотрицательных бактерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.10.2019