Среды обогащения энтеробактерий

1. Желчный бульон. Предназначен для накопления в среде сальмонелл. К бульону, приготовленному на переваре Хоттингера, добавляют нативную желчь крупного рогатого скота из расчета 900 мл бульона + 100 мл желчи (10%-ный желчный бульон).

Желчь перед добавлением к бульону подвергают следующей обработке. Рекомендуется предварительно прогреть ее текучим паром при 100°С в течение 1 ч. Затем дают отстояться в течение 15-20 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Профильтрованную горячую желчь разливают в бутыли, стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин. Перед добавлением в бульон желчь фильтруют через ватную не очень плотную пробку, вставленную в воронку, или через фильтровальную бумагу. После обработки желчь добавляют к бульону с pH 7,3±0,1, смесь разливают в пробирки или флаконы, стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 30 мин.

2. Среда Раппопорта и Вайнграуба. Среда предназначена для обогащения и дифференциации энтеробактерий.

Состав:
Бульон мясопептонный или Хоттингера — 900 мл
Желчь бычья — 100 мл
Глюкоза — 20,0 г
Индикатор Андреде — 10 мл
pH 7,3+0,1

Ингредиенты смешивают, разливают во флаконы с поплавками так, чтобы они выступали над поверхностью, по 50,0 мл. Стерилизуют текучим паром 3 дня по 20-30 мин или при 112°С в течение 20 мин.

3. Селенитовая среда (модификация среды E.Leifson). Селенитовая среда предназначена для накопления в исследуемом материале сальмонелл. Для этого взвесь фекалий в количестве 10,0-15,0 мл вносят в среду и тщательно размешивают.

Состав:
Натрия гидроселенит (без примеси теллура) (NaHSeO3) — 4,0 г
Пептон — 5,0 г
Натрия гидрофосфат (Na2HPO4) — 7,0 г
Натрия дигидрофосфат (NaH2PO4) — 3,0 г
Лактоза — 4,0 г
Вода дистиллированная — 1000,0 мл
Среду готовят из двух растворов.

Раствор 1. Предварительно определяют количественные соотношения фосфатов при взятом образце пептона и натрия гидроселенита, чтобы готовая среда имела pH 7,0±0,1. При изменении серий любого ингредиента, входящего в состав среды, проводят подтитровку.

После определения соотношения фосфатов к раствору добавляют пептон и лактозу. Разливают во флаконы по 50,0 мл, стерилизуют текучим паром 2 дня по 30 мин или однократно такое же время при 112°С. Однократно приготовленный раствор 1 можно хранить в холодильнике 1-2 мес. Количество фосфатов в рецепте среды дано в расчете на безводные препараты. При отсутствии последних навески высушивают в термостате в течение 15-16 сут.

Раствор 2. 10%-ный раствор натрия гидроселенита готовят ex tempore на стерильной дистиллированной воде.

Перед началом работы в каждый флакон с 50,0 мл основного раствора (раствор 1) асептически добавляют по 2,0 мл раствора натрия гидроселенита (раствор 2).

Готовую среду асептически разливают по 5,0-7,0 мл в стерильные пробирки и плотно закрывают пробками. Дальнейшей стерилизации не требуется.

4. Маннитный селенитовый бульон, HiMedia, Mannitol Salt Broth. Бульон используют как селективно-обогатительную среду для выделения из фекалий S. typhi, S. paratyphi В, S. paratyphi А.

Состав, г/л:
Часть А. Пептон — 5,0
Маннит — 4,0
Натрия фосфат — 10,0
pH 7,1-7,2
Часть В. Натрия селенит кислый — 4,0

Перечисленные ингредиенты части А растворяют в 1000,0 мл дистиллированной воды, в которую были добавлены 4,0 г части Б. Смесь при хорошем перемешивании подогревают до полного растворения солей.

Приготовленную среду разливают по 5,0 мл в пробирки или небольшие флаконы. Стерилизуют на кипящей водяной бане или текучим паром в течение 10 мин.

5. Магниевая среда (Rappoport Е., Konforti N., Noyon В.,) в модификации В.Л. Шигановой и Г.II. Калины (среда М). Среда предназначена для накопления сальмонелл.

Состав:
Раствор 1:
Пептон — 4,2 г
Натрия хлорид — 7,15 г
Калия дигидрофосфат (KH2PO4) — 1,43 г
Диализат дрожжевой — 9,0 мл
Вода дистиллированная — 890,0 мл

Раствор 2:
Магния хлорид (MgCl2*6H2O) — 35,7 г
Вода дистиллированная — 90,0 мл

Раствор 3:
Бриллиантовый зеленый, 0,5%-ный водный раствор — 0,9 мл
Три раствора в указанных количествах смешивают, разливают в пробирки или флаконы, стерилизуют при 112°С в течение 30 мин.
Ингибирующий эффект среды определяется влиянием бриллиантового зеленого и дегидрирующим действием магния хлорида. На рост сальмонелл данные вещества в количествах, вошедших в состав среды, не влияют. Калия дигидрофосфат обеспечивает буферность среды. Пептон с дрожжевым диализатом создает достаточную питательную основу для активного размножения сальмонелл.

6. Среда Мюллера. Среда предназначена для накопления сальмонелл.

Состав:
Мел, стерилизованный сухим жаром, — 45,0 г
или
Кальция карбонат сухой стерильный (Ca2CO3) — 25,0 г
Бульон Хоттингера (1,2-1,3 г/л аминного азота) — 900,0 мл
Раствор Люголя — 20,0 мл

Натрия тиосульфат (Na2S2O3*5H2O), 50% стерильный раствор — 100,0 мл Приготовление 50%-ного раствора натрия тиосульфата. В мерную колбу насыпают 50,0 г натрия тиосульфата, добавляют дистиллированную воду до 100,0 мл, растворяют. Стерилизуют текучим паром 30 мин.

Приготовление среды. В стерильные флаконы помещают по 4,5 г мела, стерилизуют сухим жаром, после чего в каждый флакон наливают по 90,0 мл бульона Хоттингера, стерилизуют в автоклаве при 121°С 30 мин. Устанавливают pH 7,3±0,1. Затем ex tempore в каждый флакон асептически добавляют по 2,0 мл раствора Люголя и по 10,0 мл 50%-ного раствора натрия тиосульфата.

После добавления каждого ингредиента смесь тщательно взбалтывают. Среду разливают по 8,0-10,0 мл в стерильные пробирки или по 100,0 мл во флаконы. Готовую среду не стерилизуют.

Тетратионатовая соль натрия, образующаяся в результате взаимодействия тиосульфата натрия и йода, ингибирует рост кишечной палочки и способствует размножению сальмонелл.

7. Среда Мюллера-Кауфмана. Среда предназначена для накопления сальмонелл.

Состав:
Среда Мюллера (стерильная) — 500,0 мл
Желчь крупного рогатого скота — 250,0 мл
Бриллиантовый зеленый, 0,1%-ный водный раствор — 50,0 мл

После асептического смешивания ингредиентов среду асептически разливают по 10,0 мл в стерильные пробирки. Дополнительно среду не стерилизуют. После добавления бриллиантового зеленого среду нельзя нагревать.

Добавление желчи повышает выделяемость сальмонелл за счет ингибирования роста посторонней, главным образом грамположительной, микрофлоры. Бриллиантовый зеленый угнетает размножение протея, но снижает селективность среды, если его добавляют перед ее нагреванием.

- Читать далее "Плотные дифференциально-диагностические селективные среды энтеробактерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 27.2.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.