а) Селективная дифференциально-диагностическая среда. Перед розливом в чашки Петри в остуженный до 45-50°С агар Хоттингера добавляют по 25,0 мкг на 1 мл среды полимиксина и триметоприма, а также раствор фенолфталеинфосфата натрия в конечной концентрации 0,01%, предварительно прогретого при 56°С в течение 20 мин. После перемешивания среду разливают в чашки Петри и подсушивают в течение 1,5 ч с открытыми крышками. Чашки с агаром можно хранить в условиях холодильника 2-3 сут.

б) 1%-ный содовый агар. Предварительно готовят 10%-ный раствор NaHCO₃. Для этого 10,0 г пищевой соды растворяют в 100 мл стерильной дистиллированной воды при легком подогревании на пламени спиртовки. Затем в 100,0 мл расплавленного и остуженного до 45°С агара Хоттингера добавляют 10,0 мл 10%-ного раствора соды. Среда будет лучше, если добавить, помимо соды, 10% инактивированной лошадиной сыворотки (прогретой при 56°С 30 мин). После розлива в чашки Петри и подсыхания агар можно использовать для посевов. Хранить агар не следует.

в) Среда ГКИ. Среда ГКИ им. Л.А.Тарасевича состоит из 60,0 мл раствора Хенкса и 40,0 мл бычьей (лошадиной) сыворотки, инактивированной при 56°С в течение 30 мин. Компоненты тщательно перемешивают, доводят pH до 7,2 бикарбонатом натрия. Полученную среду стерильно разливают в пробирки по 2,0 мл и закрывают стерильными резиновыми пробками. Среда может храниться при 4°С длительное время.

г) Жидкая желточная среда. Состоит из 1 части куриного желтка и 9 частей физиологического раствора. Приготовление и розлив производят стерильно без последующей стерилизации. Помещают на 2 сут. при 37°С для проверки на стерильность.

д) Приготовление рабочих растворов для фиксации и окрашивания препаратов-мазков и методы окраски:

1. Фиксирующая жидкость для фиксации мазков. Для приготовления фиксирующей жидкости с содержанием 3%-ного раствора перекиси водорода во флакон наливают 180,0 мл этилового спирта и 20,0 мл 30%-ного пергидроля. Содержание перекиси водорода в пергидроле необходимо определять по методике, изложенной в Государственной Фармакопее СССР (М„ 1968). Фиксирующую жидкость можно не менять в течение месяца, при этом флакон должен быть закрыт притертой пробкой. Для хранения лучше использовать флакон из темного стекла.

Флакон из обычного стекла необходимо держать в темном ящике (ящик лабораторного стола, холодильник). Приготовленные мазки из культур высушивают на воздухе, затем опускают во флакон с фиксирующей жидкостью. Через 30 мин стекла с мазками извлекают и просушивают на воздухе. Держать мазки более 30 мин в фиксирующей жидкости нежелательно. Можно хранить фиксированные мазки в закрытой чашке Петри в холодильнике.

2. Раствор Ребигера. 15,0-20,0 г генцианвиолета растворяют в 100,0 мл 40% формалина. Раствор выдерживают при комнатной температуре в течение нескольких часов, после чего фильтруют. Окраску мазков проводят в течение 30-60 с, не более 1 мин.

- Читать далее "Среды для выделения, культивирования и идентификации гонококка"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 27.2.2020