Тест на утилизацию органических кислот или их солей с участием специфических ферментов используется в бактериологической диагностике кишечных инфекций, в частности для идентификации некоторых видов сальмонелл.

Тест основан на посеве испытуемых микроорганизмов на комплекс сред, основой белкового питательного субстрата в которых является пептон, а единственным источником углерода — растворимые соли тартрата (винной кислоты, растворимого винного камня), муката (галактаровой, слизевой кислот) и цитраты (соли лимонной кислоты). Поэтому произрастать на них способны только те виды бактерий, которые продуцируют ферменты, способные гидролизовать эти соединения, превращая их в доступные для ассимиляции углерода химические вещества.

Проявлением происходящего в среде гидролиза органических кислот является смещение pH в кислую сторону с изменением цвета питательной среды соответственно цвету введенного в нее индикатора.

Техника постановки теста. 18-часовую культуру микроорганизма, снятую с плотной питательной среды, засевают бактериальной петлей с солями тартрата, слизевой кислоты и натрия цитрата. Посевы инкубируют в термостате 24-48 ч при температуре 36(±1) °С. Одновременно с засеянными пробирками в термостат помещают контрольные — незасеянные пробирки с используемой в опыте стерильной средой.

Учет результатов теста проводят обычно в течение первых 48 ч при обнаружении изменения цвета среды в опытных пробирках. Среда синего с зеленоватым оттенком цвета в момент посева (индикатор бромтимоловый синий) при утилизации тартрата, слизевой кислоты или цитрата вследствие их гидролиза и накопления кислых продуктов расщепления приобретает оливковый или желто-зеленый цвет.

После окончания инкубации с пробирками, содержащими среду с D-тартратом, давшими положительный результат, проводят дополнительный тест: в контрольную незасеянную среду и в опытные пробирки (положительный и отрицательный результаты теста) приливают 0,5 мл нейтрального 50% раствора уксусно-кислого свинца (СН₃СОО)₂Pb*3Н₂O. В контрольной пробирке и в пробирке с отрицательным результатом реакции появляется осадок, занимающий более 2/3 объема среды. В пробирке с положительным результатом теста отмечается значительно меньшее количество осадка.

Положительный контроль:
на тартрат — Citrobacter freundii; на мукат — Enterobacter aerogenes; на цитрат — Enterobacter cloacae.

Отрицательный контроль:
на тартрат — Enterobacter cancerogenus; на мукат — Hafnia alvei; на цитрат — Shigella sonnei.

- Читать далее "Тест на утилизацию малоната в идентификации микроорганизмов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 27.05.2019