При изучении утилизации микроорганизмами углеводов необходимо:

— во-первых, определить, какие сахара и их производные используются микроорганизмами в качестве субстрата реакции;

— во-вторых, установить, каким путем (окисления или ферментации) углевод утилизируется.

Тест основан на том, что при окислительном процессе (независимо от субстрата окисления) молекулы кислорода являются конечным акцептором Н⁺ (протонов) и электронов. Ферментация (брожение) углеводов происходит как в анаэробных, так и в аэробных условиях с участием специфических сахаролитических ферментов. При этом донорами и акцепторами электронов являются органические соединения (чаще гексозы).

Техника постановки теста. Для постановки теста используют специальные окислительно-восстановительные (OF) питательные среды с низкой концентрацией пептона и единственным углеводным субстратом (в приведенном конкретном примере — глюкоза).

В две пробирки помещают 3-4 мл стерильной среды Хью-Лейфсона. В каждую из них инокулируют уколом небольшое количество чистой культуры исследуемых бактерий. В одну из этих пробирок для создания анаэробных условий непосредственно после посева наливают, соблюдая правила асептики, стерильное вазелиновое масло, создавая слой толщиной не менее 5 мм.

Засеянные пробирки инкубируют в термостате при температуре 36(±1)°С с ежедневным в течение 3-4 сут просмотром микробного роста.

Реагентом среды Хью-Лейфсона является глюкоза, которая при утилизации бактериями подвергается окислению или ферментации.

Окислительные реакции протекают только в присутствии свободного кислорода воздуха:

С₆Н₁₂O₆ + 6O₂ → 6СO₂ + 6Н₂O

Процесс ферментации глюкозы происходит с образованием молочной кислоты и воды. Присутствие свободного кислорода воздуха реакции ферментации глюкозы не препятствует:

С₆Н₁₂O₆ → С₃Н₇СООН + 2СO₂ + 2Н₂

Для выявления произошедшей реакции в состав среды вводят двухцветный индикатор (феноловый красный, бромтимоловый синий, бромкрезоловый пурпурный), диапазон действия которых соответствует диапазону возможных изменений pH при окислении и ферментации.

Учет результатов осуществляется по изменению цвета питательной среды соответственно цвету введенного в нее индикатора при pH 6,0-6,5 по следующей схеме:

- Читать далее "Тест ONPG (тест на β-галактозидазу с о-нитрофенил-β-D-галактопиранозидом, ONPG) в идентификации микроорганизмов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 27.05.2019