Советуем для ознакомления:

Физиология:

Популярные разделы сайта:

Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента

Активную агглютинацию используют в практических целях для определения групп крови, в диагностике инфекционных заболеваний.
Пассивная гемагглютинация — наиболее распространенный вариант реакции агглютинации, применяемый главным образом в исследовательской работе. Фиксация растворимых белковых антигенов на поверхности эритроцитов осуществляется разными способами. Некоторые способы основаны на предварительной обработке эритроцитов химическими соединениями, повышающими сродство поверхности клетки к белкам. Чаще всего эритроциты обрабатывают танином, CrCl3.

В других случаях «пришивают» белковый антиген к поверхности эритроцита бифункциональными соединениями, в числе которых глутаровый альдегид, диазотированный диаминодифениламин, водорастворимые карбодиимиды. Для получения эритроцитов, «покрытых» полисахаридным антигеном, достаточно проинкубировать их в растворе полисахарида: полисахарид адсорбируется на поверхности эритроцитов, не подвергнутых какой-либо обработке. Гаптены, содержащие реакционноспособные группы, можно ковалентно присоединять к поверхности эритроцита. Так, при обработке эритроцитов динитрофенилсульфоновой кислотой к их, поверхности через свободные аминогруппы присоединяются динитрофенильиые радикалы.

Антитела также фиксируют на поверхности эритроцитов. Сенсибилизированные антителами эритроциты агглютинируют в присутствии антигена и, следовательно, могут быть использованы для обнаружения антигенов.
Для большей доступности активных центров антител их присоединяют к поверхности клетки через «ножку». Один из вариантов такого метода (А. Оловников, 1968) связан с предварительной агрегацией иммуноглобулинов глутаровым альдегидом и последующей фиксацией агрегатов на обработанных глутаровым альдегидом эритроцитах (агрегат-агглютинация).

реакция связывания комплемента

Реакция связывания комплемента (PCК)

Эта реакция относится к чувствительным непрямым методам регистрации реакции между антигеном и антителом. Она применима лишь в случае антител, относящихся к классам IgG и IgM, которые активируют комплемент по классическому пути.

Реакцию выполняют в два этапа. Первоначально проводят реакцию антиген-антитело в присутствии комплемента (обычно это сыворотка морской свинки). После инкубации смеси определяют содержание несвязавшего-ся комплексом (не активированного) комплемента с помощью реакции иммунного гемолиза.

Количественный вариант реакции связывания комплемента в одной из принятых модификации (И. Тарханова, А. Коников, 1957) основан на связывании комплемента в зоне эквивалентности системы антиген-антитело. К равным количествам антител добавляют антиген в возрастающей концентрации и комплемент. Пробы оставляют на 1 ч при 37°С или на 18 ч при 0°С. Затем в каждой пробе определяют количество свободного комплемента по способности последнего лизировать эритроциты барана, сенсибилизированные IgG-антителами кролика против эритроцитов барана.

Количество связанного комплемента выражают в СН50, т. е. количестве комплемента, необходимом для 50%-ного гемолиза сенсибилизированных антителами эритроцитов. Если выразить графически зависимость между количеством антигена в пробе и количеством связанного комплемента, полученная экспериментальная кривая окажется подобной кривой, описывающей зависимость между количеством белка преципитата и количеством добавленного антигена. В одной и той же системе антиген-антитело соотношение реагентов, соответствующее образованию максимального количества преципитата, с одной стороны, и максимальному количеству связанного комплемента, с другой, обычно совпадают.

Однако в отличие от реакции преципитации РСК чувствительнее по меньшей мере в 50—100 раз, т. е. во столько раз можно развести антисыворотку и во столько же раз уменьшить дозу антигена по сравнению с реакцией количественной преципитации, чтобы количественно охарактеризовать связывание комплемента в точке эквивалентности системы.

- Читать "Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител"

Оглавление темы "Количественное и качественное определение антител":
1. Меченные иминоксильными радикалами гаптены. Реакция антиген-антитело
2. Теория количественной преципитации. Первая иммунологическая реакция
3. Реакция преципитации в геле. Метод двойной диффузии в агаре
4. Метод радиальной иммунодиффузии. Иммуноэлектрофорез
5. Активная и пассивная гемагглютинация. Реакция связывания комплемента
6. Связывание комплемента иммунным комплексом. Радиоиммунологические методы исследования антител
7. Модификации радиоиммунного анализа. Метод инактивации фага
8. Иммуноферментный анализ. Иммунохимические методы в биохимии
9. Метод модификации гаптенами рибосомных белков. Метод иммуноэлектронной микроскопии
10. Рецепторы для гормонов. Антиидиотипические антитела