Советуем для ознакомления:

Вирусология:

Популярные разделы сайта:

Зависимость трансформации и образования вируса от синтеза ДНК. Обнаружение провирусной ДНК

При обработке клеток любым ингибитором синтеза ДНК вскоре после заражения ВСР последующее размножение вируса блокируется (Темин, 1964а, 1968а; Бейдер, 1965, 1966; Марри и Темин, 1970; Бейдер, 1972а). Эти данные позволяют считать, что в первые несколько часов вирусной инфекции необходим синтез ДНК. Наиболее убедительное доказательство того, что речь идет о синтезе вирусной, а не клеточной ДНК, получено в экспериментах Бальдуцци и Моргана (1970) и Бётигера и Темина (1970). Стационарную культуру куриных клеток заражали ВСР в присутствии 5-бромдезоксиуридина.

Через 24 ч бромдезаксиуридин удаляли, и инфекционный процесс продолжал развиваться. Однако если такие культуры облучали видимым светом, то вирус в них не образовывался. Этот результат позволяет считать, что на ранних этапах инфекции синтезировалась ДНК, содержащая бромдезоксиуридин, и что она необходима для последующего образования вируса. Несмотря на то что в цитоплазме после заражения вирусом саркомы мышей был обнаружен синтез ДНК (Хатанака и др.,1971), все попытки выделить ДНК, имеющую в своем составе бромдезоксиуридин, закончились неудачей, и мы не знаем, какие последовательности нуклеотидов она содержит — клеточные или вирусные.

Однако при высокой множественности заражения инфекционный процесс существенно более устойчив к облучению светом, чем при низкой множественности (Бётигер и Темин, 1970). Поэтому можно думать, что чем больше число заражающих геномов, тем больше синтезируется ДНК, содержащей бромдезоксиуридин; такое объяснение согласуется с предположением о вирусной (а не клеточной) природе обсуждаемой ДНК. Кроме того, урожай ВСР в клетках, которые были обработаны бромдезоксиуридином в первые 12 ч после заражения, содержит большую долю температурочувствительных мутантов и дефектных частиц, чем вирус, полученный из контрольных клеток (Бейдер и Бейдер, 1970; Бейдер и Браун, 1971).

трансформация клеток

Обнаружение провирусной ДНК с помощью гибридизации. Как мы уже упоминали, вирус-специфическую ДНК можно обнаружить в геноме как нормальных, так и стабильно трансформированных куриных клеток. Некоторые исследователи, используя метод гибридизации на фильтрах, обнаружили, что после заражения клеток ВСР количество вирус-специфической ДНК в них увеличивается (Балуда и Нейак, 1970; Балуда, 1972; Розенталь и др., 1971).

Предполагают, что это увеличение обусловлено синтезом провирусной ДНК на матрице РНК внесенного вируса. Вармэс и др. (1971), однако, не смогли обнаружить какой-либо разницы в числе копий вирусной ДНК в зараженных и незараженных клетках.

Причина такого расхождения в результатах неизвестна, но одно из возможных объяснений заключается в том, что последние авторы для выявления вируоной ДНК в клеточном геноме использовали радиоактивную вирусную ДНК, синтезированную in vitro. Известно, что такая синтетическая вирусная ДНК соответствует только 10—20% последовательностей всей вирусной РНК; поэтому с ее помощью трудно выявить небольшие изменения в количестве полных геномов.

Ясно, что присутствие интегрированной вирусной ДНК как в нормальных, так и в трансформированных клетках значительно затрудняет выявление новой провирусной ДНК, синтезируемой после заражения. Однако сам факт присутствия вирусной ДНК во всех клеточных геномах может рассматриваться как довод в пользу теории о существовании провирусной ДНК.

- Читать далее "Присутствие РНК-зависимой ДНК-полимеразы в вирионах лейковирусов. Химические ингибиторы вирусов"

Оглавление темы "Онкогенные вирусы птиц. Лейкоз мышей":
1. Куриный фактор помощник вирусов. Помощник вируса саркомы Рауса
2. Антигены трансформированных клеток. Антигены помощники вирусов
3. Свойства трансформированных опухолевыми вирусами клеток. Морфология пораженных клеток
4. Опухолеродные вирусы птиц. Поражение клеток млекопитающих опухолевыми вирусами птиц
5. Механизм поражения опухолеродными вирусами птиц. ДНК-провирус
6. Зависимость трансформации и образования вируса от синтеза ДНК. Обнаружение провирусной ДНК
7. Присутствие РНК-зависимой ДНК-полимеразы в вирионах лейковирусов. Химические ингибиторы вирусов
8. Судьба провируса в клетках. Лейковирусы мышей
9. Механизм развития лейкоза мышей. Хозяева лейкоза мышей
10. Антигены зараженных лейкозом мышей клеток. Растворимые антигены вируса лейкоза мышей