При обработке клеток любым ингибитором синтеза ДНК вскоре после заражения ВСР последующее размножение вируса блокируется (Темин, 1964а, 1968а; Бейдер, 1965, 1966; Марри и Темин, 1970; Бейдер, 1972а). Эти данные позволяют считать, что в первые несколько часов вирусной инфекции необходим синтез ДНК. Наиболее убедительное доказательство того, что речь идет о синтезе вирусной, а не клеточной ДНК, получено в экспериментах Бальдуцци и Моргана (1970) и Бётигера и Темина (1970). Стационарную культуру куриных клеток заражали ВСР в присутствии 5-бромдезоксиуридина.

Через 24 ч бромдезаксиуридин удаляли, и инфекционный процесс продолжал развиваться. Однако если такие культуры облучали видимым светом, то вирус в них не образовывался. Этот результат позволяет считать, что на ранних этапах инфекции синтезировалась ДНК, содержащая бромдезоксиуридин, и что она необходима для последующего образования вируса. Несмотря на то что в цитоплазме после заражения вирусом саркомы мышей был обнаружен синтез ДНК (Хатанака и др.,1971), все попытки выделить ДНК, имеющую в своем составе бромдезоксиуридин, закончились неудачей, и мы не знаем, какие последовательности нуклеотидов она содержит — клеточные или вирусные.

Однако при высокой множественности заражения инфекционный процесс существенно более устойчив к облучению светом, чем при низкой множественности (Бётигер и Темин, 1970). Поэтому можно думать, что чем больше число заражающих геномов, тем больше синтезируется ДНК, содержащей бромдезоксиуридин; такое объяснение согласуется с предположением о вирусной (а не клеточной) природе обсуждаемой ДНК. Кроме того, урожай ВСР в клетках, которые были обработаны бромдезоксиуридином в первые 12 ч после заражения, содержит большую долю температурочувствительных мутантов и дефектных частиц, чем вирус, полученный из контрольных клеток (Бейдер и Бейдер, 1970; Бейдер и Браун, 1971).

Обнаружение провирусной ДНК с помощью гибридизации. Как мы уже упоминали, вирус-специфическую ДНК можно обнаружить в геноме как нормальных, так и стабильно трансформированных куриных клеток. Некоторые исследователи, используя метод гибридизации на фильтрах, обнаружили, что после заражения клеток ВСР количество вирус-специфической ДНК в них увеличивается (Балуда и Нейак, 1970; Балуда, 1972; Розенталь и др., 1971).

Предполагают, что это увеличение обусловлено синтезом провирусной ДНК на матрице РНК внесенного вируса. Вармэс и др. (1971), однако, не смогли обнаружить какой-либо разницы в числе копий вирусной ДНК в зараженных и незараженных клетках.

Причина такого расхождения в результатах неизвестна, но одно из возможных объяснений заключается в том, что последние авторы для выявления вируоной ДНК в клеточном геноме использовали радиоактивную вирусную ДНК, синтезированную in vitro. Известно, что такая синтетическая вирусная ДНК соответствует только 10—20% последовательностей всей вирусной РНК; поэтому с ее помощью трудно выявить небольшие изменения в количестве полных геномов.

Ясно, что присутствие интегрированной вирусной ДНК как в нормальных, так и в трансформированных клетках значительно затрудняет выявление новой провирусной ДНК, синтезируемой после заражения. Однако сам факт присутствия вирусной ДНК во всех клеточных геномах может рассматриваться как довод в пользу теории о существовании провирусной ДНК.

- Читать далее "Присутствие РНК-зависимой ДНК-полимеразы в вирионах лейковирусов. Химические ингибиторы вирусов"