Аллергологический метод диагностики бруцелл (возбудителей бруцеллеза, Brucella)

Тестами, выявляющими повышенную сенсибилизацию организма к бруцеллезному антигену, являются: внутрикожная аллергическая проба Бюрне, опсопофагоцитарная реакция (ОФР), реакция лизиса нейтрофилов.

а) Внутрикожная аллергическая проба Бюрне. Проба основана на способности организма, сенсибилизированного бруцеллезным антигеном, специфически отвечать местной реакцией (отек, болезненность) на внутрикожное введение бруцеллина, который представляет собой фильтрат трехнедельной бульонной культуры бруцелл.

Бруцеллин вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл в ладонную поверхность предплечья. Учет реакции производят через 24-48 ч. Учитывается только размер отека в сантиметрах. В некоторых случаях аллергическая реакция становится положительной через 72 ч. Гиперемию кожи при отсутствии отека принимают за отрицательный результат. Реакция, появившаяся и исчезнувшая ранее 6 ч после введения бруцеллина, считается неспецифической.

Слабоположительной считается проба при отеке не более 2 см в диаметре, положительной — 2-6 см, резко положительной — свыше 6 см.

Введение специфического антигена в сенсибилизированный организм небезразлично для обследуемого. В этой связи заслуживают внимание эффективные методы выявления гиперчувствительности замедленного типа методом in vitro.

б) Опсонофагоцитарная реакция (ОФР). Проба основана на способности полинуклеарных нейтрофилов крови зараженного бруцеллезом организма фагоцитировать бруцеллы in vitro.

В пробирку, содержащую 0,2 мл 2%-ного раствора лимонно-кислого натрия, добавляют 0,4 мл исследуемой крови и 0,2 мл специального антигена для ОФР [4х 109 микробных клеток бруцелл (штамм B.abortus 19), убитых нагреванием, в 1 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида]. Содержимое пробирок перемешивают и 30 мин инкубируют в термостате при температуре 37"С. Затем из содержимого пробирок готовят мазки, как для подсчета лейкоцитов, фиксируют их и окрашивают по Козловскому или синькой Мансона.

Учет результатов производят путем подсчета количества фагоцитированных одним нейтрофилом бруцелл в учтенных подряд 25 нейтрофильных полинуклеарах. У здоровых людей фагоцитарный индекс в отношении бруцелл равен 0-5. Фагоцитарный индекс, равный 5-20, характеризует слабовыраженную реакцию; 21-40 — умеренную; свыше 40 — выраженную.

в) Реакция лизиса лейкоцитов основана на учете разрушения лейкоцитов сенсибилизированного организма под влиянием специфического антигена. Обладает строгой специфичностью. Позволяет получить результаты в короткие сроки — через 3-4 ч после взятия крови.

Реакция проводится в пробирках из химически чистого стекла. В качестве антигена используется взвесь убитых нагреванием бруцелл (штамм В. abortus 19) в концентрации 1х107 микробных клеток/мл.

Кровь для исследования берут в количестве 1 мл и вносят в колбочку с гепарином из расчета 75-80 ME гепарина на 1 мл крови. В две пробирки переносят по 0,4 мл гепаринизированной крови. В первую пробирку добавляют 0,1 мл бруцеллезного антигена (опытная пробирка), во вторую — 0,1 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида для установления неспецифического лизиса лейкоцитов (контрольная пробирка). Пробирки встряхивают в течение 2-3 мин и подсчитывают лейкоциты в камере Горяева. Затем пробирки инкубируют в термостате в течение 2 ч при температуре 37°С, периодически встряхивая.

После инкубации пробирки вновь встряхивают в течение 2-3 мин и подсчитывают лейкоциты. Подсчет производится двух-, трехкратно для каждой пробирки, затем выводится средний показатель.

Процент уменьшения количества лейкоцитов после инкубации в опытной и контрольной пробирках подсчитывают по формуле: (количество лейкоцитов после инкубации: количество лейкоцитов до инкубации) х 100%.

Показатель специфического лизиса лейкоцитов рассчитывают путем определения разницы между процентом уменьшения лейкоцитов в опытной пробирке и процентом уменьшения лейкоцитов в контроле. Он выражается отрицательной величиной и колеблется в пределах от -10 до -30%. Показатель меньше -10% свидетельствует о неспецифическом лизисе.

Например: если процент уменьшения количества лейкоцитов в опыте (% Оп) составляет 74,5%, а процент уменьшения количества лейкоцитов в контроле (% К) — 96,5 %, то показатель специфического лизиса равняется: 74,5 - 96,5 = - 22 (%) -реакция специфическая.

Серологические реакции и аллергическая кожная проба в различные периоды заболевания не равноценны по своему диагностическому значению и не могут заменять друг друга. Максимальная диагностическая достоверность при иммунологических исследованиях на бруцеллез достигается лишь путем применения комплексной сероаллергической диагностики, так как выраженность этих реакций на разных этапах развития инфекционного процесса неодинакова.

Соотношение между положительными и отрицательными результатами реакций по мере увеличения сроков от начала заболевания меняется закономерно. В ранние сроки от начала заболевания диагностическая ценность серологических методов выше, чем аллергологического. По мере отдаления от начала заболевания бульшую диагностическую ценность представляет внутрикожная аллергическая проба Бюрне, реакция Кумбса, ИФА.

Аллергологический метод диагностики бруцелл (возбудителей бруцеллеза, Brucella)

Примечание: При обострении инфекционного процесса, а также при суперинфекции утраченная серологическая реакция может восстановиться.

- Читать далее "Лечение и профилактика бруцеллеза"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 28.1.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.