Бактериоскопическая и бактериологическая диагностика бруцелл (возбудителей бруцеллеза, Brucella)

Диагностика предусматривает индикацию возбудителя бруцеллеза в объектах внешней среды и в патологическом материале; выделение, идентификацию и дифференциацию возбудителя; определение специфических антител и антигенов в сыворотках крови больных и лиц, подозрительных на заражение бруцеллезом.

Для этих целей используют бактериологический, биологический, серологический, аллергологический и молекулярно-генетический методы.

Материалом для исследования на бруцеллез являются:

- от людей: кровь, костный мозг, спинномозговая жидкость, моча, желчь, суставная жидкость (при артритах), гной (при абсцессах), секционный материал;

- от животных: кровь, абортированные плоды, околоплодные оболочки или желудок плода с его содержимым, лимфатические узлы, влагалищные выделения, молоко;

- пищевые продукты; сливки, сыры, творог, мясо;

- объекты внешней среды: вода, почва, навоз.

Способы получения материала для исследования приведены в таблице ниже.

Бактерииоскопическая и бактериологическая диагностика бруцелл (возбудителей бруцеллеза, Brucella)

а) Бактериоскопический метод относится к экспресс-методам диагностики бруцеллеза. Исследование проводится при помощи светового микроскопа и используется для обнаружения бруцелл в органах абортированного плода, в плаценте и выделениях из родовых путей абортировавших животных, а также как один из этапов идентификации штаммов-изолятов бруцелл.

Выявление возбудителя бруцеллеза проводят в мазках, окрашенных по Граму (бруцеллы грамотрицательны — окрашиваются в красный цвет) или в препаратах, окрашенных по способу Козловского: фиксированные препараты обрабатывают 0,5% водным раствором сафранина при подогревании до появления пузырьков, промывают дистиллированной водой и докрашивают 0,5%-ным водным раствором малахитового или бриллиантового зеленого в течение 40-50 с. Бруцеллы сохраняют красную окраску сафранина, а остальные бактерии окрашиваются в зеленый цвет.

Бактерииоскопическая и бактериологическая диагностика бруцелл (возбудителей бруцеллеза, Brucella)

б) Бактериологический метод диагностики бруцеллеза считается обязательным и наиболее достоверным, однако отрицательные результаты бактериологического исследования не дают основания для полного исключения наличия инфекции.

С учетом питательных потребностей для выделения бруцелл применяют мясо-пептонный печеночный агар (МППА), сывороточно-декстрозный агар и эритрит-агар, агары Мартена и Альбими, среду «Д».

При исследовании материала, подозрительного на контаминацию посторонней микрофлорой, к питательным средам добавляют ингибиторы: генцианвиолет (из расчета 1:200 000) или антибиотики. Пропись, рекомендованная Комитетом экспертов ФАО/ВОЗ по бруцеллезу, включает: полимиксин Н — 6 мг/л; бацитрацин — 25 мг/л; амфотерицин В — 1 мг/л; циклогексамид — 100 мг/л; Д-циклосерин — 100 мг/л; налидиксовую кислоту — 5 мг/л; ванкомицин — 20 мг/л.

Характерной особенностью возбудителя бруцеллеза является медленный рост на питательных средах, особенно в первой генерации. При посевах крови, костного мозга, мочи культуры бруцелл обнаруживаются через 5-10, а иногда через 20-30 сут. после внесения материала. При этом культуры вида В. ovis и первые генерации культур вида В. abortus способны расти только при избыточном (5-10%) содержании СО2 в атмосфере.

Посевы крови рекомендуется производить во время лихорадочного периода до начала лечения антибиотиками, это дает наибольший процент высеваемости бруцелл. Общепринятым методом получения гемокультур является посев крови по методу Кастанеда, при котором кровь, взятую из локтевой вены в объеме 10 мл, засевают у постели больного по 5 мл в две емкости с бифазной средой. Среда представляет собой скошенный во флаконе (лучше прямоугольном, вместимостью 100-200 мл) агар (30-50 мл) с бульоном (25-30 мл). Один флакон с посевом инкубируют при повышенном (5-10%) содержании СО2 (в эксикаторе), другой — в обычной атмосфере воздуха, при 37°С.

Начиная с 4-го дня посевы просматривают. При отсутствии роста поверхность агара орошают бульоном. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл — мелкие, бесцветные, выпуклые. Их отбирают для накопления культуры с целью последующей идентификации и дифференциации. Если в течение месяца колонии бруцелл не обнаруживаются, делают контрольный высев на плотную питательную среду.

В последнее время в практике работы бактериологических лабораторий стала применяться жидкая транспортная среда для выделения бруцелл. Использование ее позволяет совместить этапы транспортировки крови в лабораторию и подращивания посевного материала.

Исследуемая кровь в количестве 5 мл, взятая шприцем стерильно из локтевой вены больного, вносится той же иглой во флаконы со средой через предварительно обработанную спиртом резиновую пробку. Хранить засеянные флаконы до отправки можно в течение 2 нед. в зависимости от конкретных условий: в термостате, при комнатной температуре или в холодильнике.

В бактериологической лаборатории содержимое флакона высевают на плотные питательные среды или во флаконы для выращивания по методу Кастанеда, как описано выше.

Методика получения гемокультуры полностью применима для исследования свободных от посторонней микрофлоры проб (спинномозговой жидкости, костного мозга и др). При исследовании других объектов (пробы почвы, пищевых продуктов и др.) их перед посевом следует перевести в жидкую фазу путем эмульгации в 0,9% растворе натрия хлорида или в бульоне, а затем концентрировать путем центрифугирования, фильтрации через мембранные фильтры или добавления бруцеллезной агглютинирующей сыворотки в соотношении 1:100.

- Читать далее "Биологический метод диагностики бруцелл (возбудителей бруцеллеза, Brucella)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 28.1.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.