ГОСТ 10444.8-88 Продукты пищевые. Метод определения Bacillus cereus.

Метод позволяет выявить в пищевых продуктах В. cereus и близкие к нему виды: В. anthracis, В. thuringiensis, В. cereus var. mycoides.

По 0,1-0,2 мл продукта либо его разведения или разведения культуральной жидкости вносят параллельно в две чашки Петри на поверхность подсушенной селективной среды (желточный агар с хлористым натрием, полимиксином и ТТХ, или желточный агар с полимиксином и феноловым красным, или селективный агар для В. cereus, или лецитин-агар) и тщательно равномерно распределяют по всей поверхности стерильным стеклянным шпателем.

Культуральную жидкость можно также высевать при помощи петли методом истощающего штриха. Чашки с посевами переворачивают и инкубируют при 30(±1) °С в течение 24-48 ч.

Учитывают характерные колонии, для подсчета выбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 таких колоний. Для подтверждения принадлежности к В. cereus отбирают не менее пяти характерных колоний.

Морфологические и биохимические свойства выделенных микроорганизмов изучают используя суточные культуры, выращенные на скошенном МПА. В. cereus на скошенном МПА растет в виде сплошного белого налета, иногда с мучнистой поверхностью.

Из культур готовят мазки и окрашивают их по Граму; подвижность определяют микроскопически в раздавленной или висячей капле. В. cereus — крупные подвижные или неподвижные грамположительные палочки (1,0-1,2 х 3-5 мкм) со слегка закругленными концами, в мазках расположены в виде цепочек или штакетообразных скоплений, реже отдельно друг от друга. Образуют эллипсоидные субтерминальные или центральные споры (споры клетку не расширяют).

Для выявления способности сбраживать глюкозу культуры высевают уколом в столбик среды с глюкозой и бромкрезоловым пурпурным. Посевы инкубируют при 30(±1) °С в течение 24 ч. В. cereus ферментирует глюкозу с образованием кислоты (среда окрашивается с желтый или желто-коричневый цвет по всей длине укола).

Для выявления способности к ферментации маннита культуры высевают уколом в столбик среды с маннитом и бромкрезоловым пурпурным. Посевы культивируют при 30(±1)°С в течение 24 ч. В. cereus маннит не использует и, следовательно, цвет среды не меняет.

Для обнаружения способности образовывать ацетоин культуры высевают на пептонную среду с глюкозой и термостатируют при 30(±1) °С в течение 24 ч. Далее поступают как указано в отдельной статье на сайте. В. cereus образует ацетоин.

Проводят тест на способность к редукции нитратов. Сначала нужно обязательно убедиться в отсутствии нитритов в используемой среде. Для этого в две контрольные пробирки с нитратной средой добавляют по 0,2-0,5 см³ реактива на нитриты (или используют йодокрахмальный реактив). Если через 15 мин не произошло покраснения среды, то последнюю можно использовать. Культуры высевают в проверенную нитратную среду и инкубируют при 30(+1) °С в течение 24 ч. Затем в каждую пробирку вносят по 0,2-0,5 см³ реактива на нитриты.

Если по прошествии 15 мин не произошло покраснения, то добавляют немного порошка цинка и ждут еще 10 мин. Покраснение среды после внесения цинка указывает, что реакция отрицательная (восстановления нитратов не произошло). Если после добавления цинка среда не покраснела, то делают вывод, что редукция нитратов произошла. В. cereus восстанавливает нитраты в нитриты.

К В. cereus относят подвижные грамположительные спорообразующие палочки, способные к нитратредукции, образованию ацетоина и ферментации глюкозы и не способные ферментировать маннит. При проведении количественного учета считают, что если не менее четырех характерных колоний из выбранных пяти (т. е. не менее 80%) можно отнести к В. cereus, то все характерные колонии на чашке Петри принадлежат к этому микроорганизму. В остальных случаях количество В. cereus определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству характерных колоний, взятых для подтверждения.

Пересчет количества В. cereus на 1 г (см³) продукта осуществляют по формуле:

M = NC/m,

где М—количество микроорганизмов в 1 г (см³) продукта;

N — степень разведения навески;

m — количество инокулята, внесенное для посева в чашку Петри;

С — округленное среднеарифметическое значение числа колоний.

Конечный результат вычисления выражают числом от 1,0 до 9,9x10ⁿ.

- Читать далее "Определение молочно-кислых микроорганизмов в пищевых продуктах"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 14.10.2019