ГОСТ 28560-90 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий родов Proteus, Morganella, Providencia.

ГОСТ Р 50396.7-92 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод выявления бактерий рода Proteus;

ГОСТ 9958-81 Колбасные изделия и продукты из мяса. Методы бактериологического анализа.

ГОСТ 30364.2-96 Продукты яичные. Методы микробиологического контроля

а) Выявление различных форм Proteus. Для обнаружения роящихся Н-форм Proteus производят посев по методу Шукевича: 0,5 см³ исследуемого продукта или его взвеси засевают в конденсационную воду свежескошенного МПА, разлитого в широкие пробирки, не касаясь при этом поверхности среды. Вертикально поставленные пробирки с посевами инкубируют 18-24 ч при 37(±1)°С. Если на скошенном МПА наблюдается вползающий нежный с голубым оттенком вуалеобразный рост, сопровождающийся резким гнилостным специфическим запахом, то из верхнего края выросшей культуры готовят препараты, окрашивают по Граму и путем микроскопии раздавленной или висячей капли выявляют подвижность бактерий.

Для обнаружения нероящихся О-форм Proteus по 0,2 см³ исследуемого продукта или его взвеси вносят на поверхность среды Плоскирева и равномерно распределяют по всей агаровой пластинке стерильным стеклянным шпателем. Чашки переворачивают и инкубируют при 37(±1)°С в течение 18-24 ч. При просмотре посевов отмечают характерные для Proteus, колонии, подлежащие дальнейшему исследованию. На среде Плоскирева О-форма растет в виде нежных, блестящих прозрачных колоний с характерным запахом, слегка подщелачивающих среду, которая окрашивается вокруг них в желтый цвет.

При более длительном хранении чашек с посевами колонии мутнеют, а их центр приобретает бурую окраску. Из подозрительных колоний готовят мазки и окрашивают их по Граму.

К Proteus относят прямые подвижные (иногда встречаются неподвижные формы, лишенные жгутиков) грамотрицательные палочки с закругленными концами, не образующие спор и капсул. Клетки склонны к полиморфизму. Встречаются и кокковидные, а также нитевидные формы.

Для дальнейшего подтверждения принадлежности выделенных бактерий к роду Proteus культуры пересевают на скошенный МПА и выращивают в течение 24 ч при 37(±1)°С.

Суточные культуры с МПА пересевают методом укола в столбик и штрихом по скошенной поверхности одной из сред (среда Крумвиде-Олькеницкого, среда Клиглера, трехсахарный агар). Посевы термостатируют при 37(±1)°С в течение 24-48 ч. Бактерии рода Proteus ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа и образуют сероводород (о чем свидетельствует почернение столбика среды), расщепляют мочевину и не ферментируют лактозу и маннит.

Определение способности к дезаминированию фенилаланина проводят как описано в отдельной статье на сайте. Бактерии рода Proteus дезаминируют фенилаланин.

Выделенные бактерии относят к роду Proteus при обнаружении характерных полиморфных грамотрицательных не образующих спор палочек, сбраживающих глюкозу, образующих сероводород и дезаминирующих фенилаланин.

В ряде случаев достаточно проведения анализа в более сокращенном виде. При исследовании яичных продуктов выявляют только Н-форму (устанавливают морфологию клеток, подвижность, отношение к окраске по Граму, изучают способность сбраживать глюкозу и продуцировать сероводород) и на основании полученных таким образом результатов делают вывод о наличии Proteus в исследованном количестве продукта. При определении протеев в колбасных изделиях и в продуктах из мяса можно не выявлять способность выделенных микроорганизмов к дезаминированию фенилаланина.

б) Установление видовой принадлежности бактерий рода Proteus. По 1 см³ продукта и (или) соответствующих разведений высевают в пробирки с 5 см³ жидкой селективной среды с полимиксином. Посевы термостатируют при 36(± 1) °С в течение 48 ч.

При просмотре посевов учитывают пробирки с признаками роста микроорганизмов: помутнение среды, приобретение средой синего цвета вследствие расщепления мочевины. Из всех пробирок, в которых обнаружено помутнение среды, производят высев истощающим штрихом на поверхность дезоксихолат-цитрат-лактозного или дифференциально-диагностического агара. Посевы инкубируют при 36(±1)°С в течение 48 ч.

На вышеупомянутых плотных средах бактерии образуют круглые колонии диаметром 1-3 мм. Роящиеся Proteus отличаются ползучим ростом. Для дальнейшего исследования отбирают не менее пяти характерных колоний.

Для изучения физиолого-биохимических свойств используют суточные культуры, выращенные на МПА.

Определение способности к дезаминированию фенилаланина проводят как описано в отдельной статье на сайте. Бактерии рода Proteus дезаминируют фенилаланин. Положительную реакцию дают также бактерии родов Morganella и Providencia.

Определение способности к ферментации глюкозы и образованию сероводорода проводят как указано в отдельной статье на сайте. Бактерии рода Proteus образуют сероводород, бактерии родов Morganella и Providencia сероводород не образуют. Важно отметить, что Р. myxofaciens может образовывать сероводород и на 3-4-е сутки, вследствие чего целесообразно при отсутствии сероводорода через 48 ч продолжать инкубирование посевов до 4 суток.

Для дифференциации видов Р. vulgaris и Р. mirabilis культуры, образующие сероводород, исследуют на способность образовывать индол и декарбоксилировать орнитин.

Для выявления способности к образованию индола поступают как описано в отдельной статье на сайте. Р. vulgaris образует индол, а Р. myxofaciens и Р. mirabilis индола не образуют.

Для определения наличия орнитиндекарбоксилазы культуры высевают на среду с орнитином и инкубируют при 36(±1) °С в течение 48 ч. При положительной реакции среда мутнеет и изменяет свой цвет на фиолетовый. Р. mirabilis дает положительную реакцию, а Р. vulgaris и Р. myxofaciens орнитин не декарбоксилируют.

Суммируют полученные результаты и делают вывод об обнаружении бактерий рода Proteus (бактерии, дезаминирующие фенилаланин и образующие сероводород). К Р. vulgaris относят микроорганизмы дезаминирующие фенилаланин, образующие сероводород и индол, не декарбоксилирующие орнитин. Р. mirabilis дезаминируют фенилаланин, образуют сероводород и не образуют индол, декарбоксилируют орнитин.

- Читать далее "Определение Bacillus cereus в пищевых продуктах"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 14.10.2019