Методы экспресс-диагностики хеликобактер пилори (H. pylori)

Успехи бактериологической диагностики хеликобактериоза очевидны; в настоящее время выделение чистой культуры H.pylori является процедурой, доступной бактериологической лаборатории любого лечебно-профилактического учреждения. Лишь оценка биологических признаков свежевыделенной культуры Н. pylori позволяет составить исчерпывающее представление о течении хеликобактериоза у ее хозяина — пациента, страдающего тем или заболеванием гастродуоденальной области.

Лишь выделение значительного числа культур обеспечивает возможность систематического изучения биологических свойств вида в целом, оценки характера и степени распространенности приобретенной антибиотикорезистентности, эпидемиологического надзора за распространением хеликобактериоза.

Вместе с тем нельзя не отметить, что бактериологическая диагностика хеликобактериоза в классической аранжировке позволяет получить диагностически значимый результат в сроки, не соответствующие требованиями клиники. В этой связи безусловно оправданными выглядят попытки разработки нетрадиционных аранжировок бактериологического метода исследования — диагностических приемов, позволяющих идентифицировать Н. pylori непосредственно в исследуемом материале, минуя продолжительный этап выделения чистой культуры, т.е. в значительно более короткие сроки.

а) Быстрый уреазный тест. Как отмечалось выше, уровень уреазной активности культур Н.pylori столь высок, что придает им специфичность. Ни один из известных биологических объектов не способен к продукции уреазы в эквивалентном количестве и в сопоставимые сроки. Иными словами, Н. pylori может быть идентифицирован по уровню своей уреазной активности. Это уникальное биологическое свойство Н. pylori можно выявить простым химическим путем: гидролиз мочевины в присутствии уреазы сопровождается интенсивным защелачиванием среды, что может быть отражено изменением окраски соответствующим образом подобранного индикатора.

В настоящее время существует достаточное количество коммерческих вариантов быстрого уреазного теста, построенных по этому химическому принципу и позволяющих выявить уреазную активность Н. pylori не только в его чистых культурах, но и непосредственно в биопсийных образцах слизистой оболочки желудка. Действительно, образец слизистой оболочки желудка, помещенный в рабочую тест-камеру (пробирку, кювету, лунку и т.п.), в случае присутствия в нем Н. pylori и, следовательно, уреазы, способен изменить pH окружающей среды, причем в сравнительно короткие сроки (не превышающие 30-45 мин). Поскольку именно скорость изменения окраски индикатора придает тесту специфичность, абсолютно недопустимо повышение продолжительности выполнения теста.

Пренебрежение этим требованием неизбежно приводит к ложноположительным результатам, так как в удлиненные сроки гидролиз мочевины способны осуществить и иные, менее «проворные» уреазопродуцирующие микроорганизмы, например, рода Proteus, в изобилии присутствующие в желудке при гипо- и анацидных состояниях.

По замыслу, быстрый уреазный тест выполняется врачом-эндоскопистом в условиях эндоскопического кабинета. Наилучшие результаты приносит постановка теста с образцом слизистой оболочки, взятым с угла желудка. Тест обладает достаточной чувствительностью и специфичностью в случае относительно высокой обсемененности образцов Н. pylori; при низкой обсемененности частота ложноотрицательных результатов становится непомерно высокой. Поэтому при оценке эффективности эрадикационной противохеликобактерной терапии быстрый уреаз-ный тест следует выполнять с осторожностью.

б) Дыхательный тест. На способности Н. pylori к быстрому гидролизу мочевины основан способ (тест) его идентификации, не требующий не только выделения чистой культуры, но и отбора образца биологического материала.

Среди продуктов гидролиза мочевины уреазой Н. pylori имеется углекислота, немедленно всасывающаяся слизистой оболочкой желудка и в течение нескольких минут появляющаяся в выдыхаемом воздухе в виде углекислого газа. По-видимому, у лиц, чей желудок колонизирован Н. pylori, выдыхаемый воздух содержит несколько большее количество углекислого газа, нежели у неинфицированных. Молекулы углекислого газа, образовавшегося вследствие гидролиза мочевины уреазой Н. pylori, могут быть легко отдифференцированы от аналогичных продуктов тканевого метаболизма человека, если они содержат меченый атом углерода. При приеме внутрь раствора мочевины, молекулы которой содержат радиоактивный атом углерода 14С или нерадиоактивный 13С, последние, в случае гидролиза мочевины уреазой Н. pylori, могут быть обнаружены в выдыхаемом воздухе при помощи сцинтилляционного счетчика либо масс-спектрометра соответственно.

Понятно, что при хеликобактериозе различной степени выраженности степень насыщения выдыхаемого воздуха мечеными молекулами углекислого газа прямо пропорционально степени обсемененности слизистой оболочки желудка Н. pylori. Помимо чрезвычайно высокой чувствительности и абсолютной специфичности, практически не зависящих от степени обсемененности слизистой оболочки, дыхательный тест занимает особое положение среди всех прочих методик выявления Н.pylori; лишь он позволяет судить о степени колонизации всей поверхности слизистой оболочки желудка, а не отдельных ее участков.

Существуют, однако, ограничения на повсеместное применение дыхательного теста. Изотоп углерода 11С обладает радиоактивностью, уровень которой достаточен для реальной угрозы здоровью медицинского персонала; безопасный для здоровья изотоп 13С может быть обнаружен путем масс-спектрометрии — высокоточного метода идентификации веществ, стоимость выполнения которого лежит за пределами возможностей подавляющего большинства лечебно-профилактических учреждений. Определенный оптимизм внушает принципиальная возможность применения для обнаружения изотопа 13С значительно менее дорогого и трудоемкого лазерного анализа.

в) Полимеразная цепная реакция. Внедрение в диагностическую практику полимеразной цепной реакции (ГЩР) существенным образом изменило представления о диагностических возможностях бактериологического метода исследования. Как было отмечено выше, посредством ГЩР может быть осуществлена не только предельно точная идентификация выделенных культур H.pylori, но и оценены степень их патогенности и профиль антибиотикорезистентности. Однако при попытке обнаружить фрагменты генов Н. pylori, значимых для его идентификации, непосредственно в биопсийных образцах, ПЦР приносит не столь выразительные результаты. Не вдаваясь в анализ причин подобного явления, отметим, что чувствительность и специфичность ПЦР не уступает чувствительности и специфичности бактериологического метода исследования лишь при высокой степени обсемененности биопсийного образца Н. pylori, при низкой же обсемененности она оставляет желать много лучшего, что ставит под сомнение целесообразность применения ПЦР для оценки эффективности эрадикационной терапии.

В то же время одна из аранжировок ПЦР требует особого к себе внимания. При ее помощи фрагменты ДНК Н. pylori могут быть обнаружены в фекалиях, и соответствующий неинвазивный (не требующий отбора биологической пробы в ходе верхней эзофагогастродуоденоскопии) тест мог бы быть успешным как с клинической и лабораторной, гак и с коммерческой точки зрения. В направлении разработки теста такого рода в настоящее время ведется интенсивная исследовательская работа, и первые результаты выглядят вполне обнадеживающе.

г) Тесты антигенной диагностики. Поскольку погибшая часть популяции Н. pylori постоянно поступает в нижележащие отделы желудочно-кишечного тракта, где подвергается более или менее сильному разрушению, вполне оправданной выглядит попытка обнаружения антигенов Н. pylori в фекалиях. Описаны результаты весьма успешных экспериментов по обнаружению антигенов Н. pylori в фекалиях при помощи реакции иммуноферментного анализа (ИФА) и радиоиммунного исследования, более того, сконструированы коммерческие тест-системы ИФА, занявшие свое место среди неинвазивных методик обнаружения Н. pylori. Как и следовало ожидать, чувствительность и специфичность тестов антигенной диагностики при низкой степени насыщенности фекалий антигенами Н. pylori не слишком велики.

Низкое содержание антигенов Н. pylori в фекалиях отмечается в результате не вполне эффективной эрадикационной терапии, и ложноотрицательный результат диагностического теста чреват здесь весьма серьезными последствиями: пациенту, считающему себя излеченным, грозит возникновение рецидива заболевания, пусть и в отдаленные сроки.

д) Тесты ускоренной серологической диагностики. Сведения об инфицированности пациента H.pylori играют зачастую решающую роль при назначении верхней эзофагогастродуоденоскопии, гистологического и бактериологического исследований. Поскольку подобного рода решения принимаются, как правило, врачом-гастроэнтерологом во время поликлинического приема, тесты ускоренной серологической диагностики хеликобактериоза оказываются незаменимыми. Такие тесты выполняются врачом-гастроэнтерологом в условиях лечебного кабинета, поэтому их называют «докторскими тестами».

Для выполнения «докторского теста» требуется не более 5-10 мкл крови, которую берут из пальца. Образец крови вносят в тест-систему оригинального дизайна, где в течение 10-15 мин важнейшие белки крови разделяются по длине полосы нитроцеллюлозы по принципу сухой хроматографии. Антихеликобактерные антитела связываются с антигенами H.pylori, нанесенными на полосу нитроцеллюлозы, что проявляется появлением на поверхности последней специфически окрашенной полосы.

«Докторские тесты», как и положено скриннинговым тестам, отличаются высокой чувствительностью, но невысокой специфичностью, что в полной мере отвечает требованиям к ним — ориентировочная оценка вероятности инфицирования пациента Н. pylori.

- Читать далее "Серологическая диагностика хеликобактер пилори (H. pylori)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 11.1.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.