Методика проведения проведения простой (одиночной) линейной иммунодиффузии по Удену (J. Oudin, 1946)
Простая (одиночная) линейная иммунодиффузия по Удену (J. Oudin, 1946) заключается в следующем: один компонент иммунного комплекса (антисыворотка) включен в состав самого геля. Другой (антиген) — диффундирует в гель в одном направлении и, соединяясь с первым, образует полосы преципитата.
Для постановки реакции необходимо иметь:
— антиген-преципитиноген;
— преципитирующую антисыворотку;
— агар Дифко (Нобля) («Sigma», США) или агарозу;
— изотонический раствор натрия хлорида или ФСБ, рН7,2-7,6;
— натрия азид 1%;
— преципитационные пробирки или стеклянные трубочки;
— пипетки градуированные и пастеровские;
— водяную баню.
Техника постановки. Готовят гелевую среду, содержащую 1-2% агара Дифко или агарозу. К расплавленному и охлажденному до 45-50 °С гелю добавляют равное количество подогретой до той же температуры преципитирующей сыворотки, осторожно перемешивают, не допуская вспенивания, и разливают по узким преципитационным пробиркам или стеклянным трубкам с внутренним диаметром 1,5-4,5 мм на высоту 3-4 см.
Предварительно внутреннюю их поверхность покрывают тонким слоем агара. Для этого указанные емкости наполняют горячим агаром (90 °С), который быстро отсасывают пастеровской пипеткой, помещают в охлажденную жидкость на 10-15 мин и сушат в вакуум-эксикаторе 3-4 дня. В результате внутренняя поверхность трубок оказывается покрытой тонкой пленкой агара, которая предотвращает проникновение раствора антигена между гелем и стеклом.
После застудневания геля, содержащего преципитирующую сыворотку, их ставят в штатив в вертикальном положении и наслаивают раствор антигена на высоту 2-3 см. Раствор антигена покрывают вазелиновым маслом для предотвращения испарения. Выдерживают 48 ч при 4 °С. В том случае, если антиген и антитело комплементарны, в геле формируется визуально различимая полоса преципитации. При этом длина фронта полосы преципитации будет пропорциональна концентрации антигена.
- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 17.08.2019
- Определение функциональной активности лейкоцитов
- Оценка гуморального иммунитета
- Методы серодиагностики инфекционных болезней: реакция агглютинации
- Методика проведения реакции Кумбса (антиглобулинового теста)
- Методика проведения реакции пассивной гемагглютинации (РПГА)
- Методика проведения реакции торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА)
- Методика проведения реакции латекс-агглютинации (РЛА)
- Методика проведения реакции коагглютинации (КОА)
- Методика проведения реакции кольцепреципитации
- Методика проведения простой (одиночной) линейной иммунодиффузии по Удену (J. Oudin, 1946)