Методика проведения проведения простой (одиночной) линейной иммунодиффузии по Удену (J. Oudin, 1946)

Простая (одиночная) линейная иммунодиффузия по Удену (J. Oudin, 1946) заключается в следующем: один компонент иммунного комплекса (антисыворотка) включен в состав самого геля. Другой (антиген) — диффундирует в гель в одном направлении и, соединяясь с первым, образует полосы преципитата.

Для постановки реакции необходимо иметь:
— антиген-преципитиноген;
— преципитирующую антисыворотку;
— агар Дифко (Нобля) («Sigma», США) или агарозу;
— изотонический раствор натрия хлорида или ФСБ, рН7,2-7,6;
— натрия азид 1%;
— преципитационные пробирки или стеклянные трубочки;
— пипетки градуированные и пастеровские;
— водяную баню.

Техника постановки. Готовят гелевую среду, содержащую 1-2% агара Дифко или агарозу. К расплавленному и охлажденному до 45-50 °С гелю добавляют равное количество подогретой до той же температуры преципитирующей сыворотки, осторожно перемешивают, не допуская вспенивания, и разливают по узким преципитационным пробиркам или стеклянным трубкам с внутренним диаметром 1,5-4,5 мм на высоту 3-4 см.

Предварительно внутреннюю их поверхность покрывают тонким слоем агара. Для этого указанные емкости наполняют горячим агаром (90 °С), который быстро отсасывают пастеровской пипеткой, помещают в охлажденную жидкость на 10-15 мин и сушат в вакуум-эксикаторе 3-4 дня. В результате внутренняя поверхность трубок оказывается покрытой тонкой пленкой агара, которая предотвращает проникновение раствора антигена между гелем и стеклом.

После застудневания геля, содержащего преципитирующую сыворотку, их ставят в штатив в вертикальном положении и наслаивают раствор антигена на высоту 2-3 см. Раствор антигена покрывают вазелиновым маслом для предотвращения испарения. Выдерживают 48 ч при 4 °С. В том случае, если антиген и антитело комплементарны, в геле формируется визуально различимая полоса преципитации. При этом длина фронта полосы преципитации будет пропорциональна концентрации антигена.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 17.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.