Методика проведения реакции Кумбса (антиглобулинового теста)

Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест) применяется для выявления неполных (блокирующих) антител. Такое название эти антитела получили в связи с тем, что они имеют один активный центр для связывания с антигеном. Неполные антитела образуются в организме человека при некоторых хронических инфекциях (бруцеллез, туберкулез, сибирская язва и др.) в значительном количестве, при неинфекционных патологических состояниях—резус-конфликте, аутоиммунных заболеваниях (красная волчанка, ревматоидный артрит, васкулиты и др.).

Обнаружение неполных антител имеет важное значение в диагностике таких болезней. Взаимодействие неполных антител с антигеном in vitro не приводит к образованию макроагрегатов, выявляемых визуально. Поэтому в реакцию Кумбса включают дополнительный компонент — антиглобулиновую сыворотку. Ее получают путем иммунизации кроликов человеческим глобулином. Эта сыворотка содержит бивалентные антитела к глобулинам человека, в том числе и к неполным антителам.

Реакция Кумбса проводится в два этапа. На первом этапе происходит взаимодействие антигена с неполными антителами. Результат этого взаимодействия не виден. На втором этапе комплекс антиген — неполное антитело связывается антиглобулиновым бивалентным антителом. Оно может связать две молекулы неполных антител, которые адсорбированы на антигене.

В результате образуются хорошо видимые макроконгломераты. Это прямая реакция Кумбса. Но существует и другая методика — непрямая реакция Кумбса.

Методика проведения реакции Кумбса (антиглобулинового теста)
Реакция Кумбса:
I этап -взаимодействие антигена (АГ) с неполными антителами (Ат).
II этап — связывание комплексом АГ+Ат (неполное) с антителами антиглобулиновой сыворотки, которые являются бивалентными.
АтАГС — антитела антиглобулиновой сыворотки

При постановке непрямой реакции используется эритроцитный диагностикум, который представляет собой взвесь эритроцитов, на поверхности которых адсорбирован специфический антиген. Результатом такого варианта реакции Кумбса будет агглютинация эритроцитов.

Например, антитела к резус-антигену эритроцитов, которые появляются при беременности резус-отрицательной матери резус-лоложительным плодом, определяют так:

— на первом этапе к разведениям испытуемой сыворотки добавляют эритроциты, сенсибилизированные резус-антигеном, и выдерживают 1 ч при 37 °С;

— на втором этапе отмывают эритроциты от сыворотки, при этом на их поверхности остаются фиксированные резус-антигеном неполные антитела. К этому комплексу добавляют антиглобулиновую сыворотку, полученную путем иммунизации кролика иммуноглобулином человека.

Инкубируют 30 мин при 37 °С, после чего учитывают результаты по наличию или отсутствию гемагглютинации.

- Читать далее "Методика проведения реакции пассивной гемагглютинации (РПГА)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 17.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.