Необходимый набор сред:
• 5%-ный кровяной агар.
• Среда Лидс.
• Среда Клиглера (или любая другая дифференциальная плотная двухсахарная среда).
• Среды Хью-Лейфсона с глюкозой (2 пробирки).
• Среда для определения подвижности.
• Среда для выявления желатиназы.
• Жидкая среда Симмонса с цитратом.
• Сердечно-мозговой бульон для выявления способности к росту при разных температурах (3 пробирки).
• Среда с конго красным для выявления способности к образованию биопленки.
• Агар Мак-Конки.

а) Среда Лидс (Leeds), селективная, для первичного выделения из инфицированного материала ацинетобактеров (и других неферментирующих бактерий).

Состав:
• кислотный гидролизат казеина (Oxoid) — 15, 0 г,
• нейтрализованный соевый пептон (Oxoid) - 5,0 г,
• хлорид натрия NaCl — 5,0 г,
• D-фруктоза — 5,0 г,
• сюкроза — 5,0 г,
• D-маннит — 5,0 г,
• L-фенилаланин (Sigma) — 1,0 г,
• железа-аммония цитрат — 0,4 г,
• феноловый красный — 0,02 г,
• агар — 10,0 г,
• дистиллированная вода — 1000,0 л.
• pH 7,2

Антибиотики:
• Ванкомицин — 10,0 мг,
• цефзулодин — 15,0 мг,
• цефрадин — 50,0 мг.

Приготовление:
Все навески ингредиентов, кроме антибиотиков, растворяют в воде, смесь автоклавируют про температуре 121°С 15 минут. К охлажденной до 50-55°С среде добавляют антибиотики. Среду разливают в чашки Петри. Незасеянная среда имеет оранжевый цвет. Колонии ацинетобактера — розовые, цвет среды под колонией и вокруг нее — красно-фиолетовый. Сходные колонии имеют В. cepacia, однако они легко дифференцируются, так как дают положительную реакцию на оксидазу. Колонии других оксидазоотрицательных бактерий отличаются по форме и цвету от колоний ацинетобактеров. Рост грамположительных кокков подавляется.
Готовые чашки со средой могут храниться в холодильнике в полиэтиленовом пакете до двух недель.

б) Агар Мак-Конки для выявления лактозополжительных и лактозоотрицательных энтеробактерий, стенотрофомонаса и ацинетобактера A. baumannii.

Состав:
• пептон — 20,0 г,
• лактоза — 10,0 г,
• желчные соли — 1,5 г,
• натрия хлорид NaCl — 5,0 г,
• нейтральный красный — 0,03 г,
• агар — 15,0 г,
• вода дистиллированная — 1000,0 мл.
• pH 7,2.

После растворения всех ингредиентов среду стерилизуют дробно при 100°С по 30 мин три дня подряд.

Энтеробактерии дают рост красных или сероватых колоний в зависимости от разложения ими лактозы. A. baumannii растет в виде мелких красноватых (розовых) колоний. Рост грамположительных и многих грамотрицательных бактерий подавляется благодаря действию желчных солей.

в) Среда с конго-красным для выявления способности ацинетобактеров формировать биопленку.

Состав:
• питательный агар (на сердечно-мозговом настое или на основе среды Мюллера-Хинтона) — 100,0;
• сюкроза — 5,0 г;
• конго-красный — 0,08 г.
• pH 7,2.

Стерилизация при 112°С 15 мин. Среда имеет розовый цвет.

Применение среды. Вначале испытуемую культуру выращивают в 10,0 мл триптиказо-соевого бульона при 37°С 5 суток, затем делают высев на агар с конго красным, инкубируют при 37°С 1 сутки и оставляют еще на 24 часа при комнатной температуре, после чего учитывают результат. Колонии ацинетобактера, образующие биопленку, имеют красный цвет, не образующие — белый.

- Читать далее "Питательные среды для неклостридиальных анаэробных бактерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.6.2020