Питательные среды для неклостридиальных анаэробных бактерий

Полужидкие среды для транспортировки, культивирования и определения чувствительности:

а) Среда АС. Используется для быстрой транспортировки материала (1-2 часа) и культивирования анаэробных бактерий и микроаэрофильных стрептококков, а также для определения чувствительности методом разведений (пропись фирмы Difco, США)

Состав:
• пептон № 3-20,0 г,
• экстракт телячьего бульона — 3,0 г,
• дрожжевой экстракт — 3,0 г,
• солодовый экстракт — 3,0 г,
• аскорбиновая кислота — 0,2 г,
• бакто-декстроза — 5,0 г,
• агар — 1,0 г.
• рН-7,3+0,1

Приготовление:
Смешать компоненты до получения порошка и поместить в 1000 мл холодной дистиллированной воды, дать набухнуть. Прогреть на водяной бане до полного растворения частиц. Разлить в соответствующую посуду. Стерилизовать автоклавированием при 121°С в течение 15 мин.

б) Тиогликолевая среда. Назначение то же, что и среды АС.

Состав:
• гидролизат казеина — 15,0 г,
• дрожжевой (мясной) экстракт — 5,0 г,
• глюкоза — 5,5 г,
• Хлорид натрия — 2,5 г,
• L-цистеин — 0,5 г,
• тиогликолят натрия — 0,5 г,
• резазурин — 0,01 г,
• агар — 7,5 г,
• рН-7,3+0,1

Приготовление:
В 1000 мл дистиллированной воды вносят компоненты и нагревают смесь до 80-90°С. Разливают в пробирки или флаконы и стерилизуют в автоклаве при 121°С 15 мин. Нормальный цвет — соломенно-желтый. Хранят в темном месте, контролируя изменение окраски. В случае покраснения верхней части столбика среды более чем на 1/3, ее восстанавливают путем прогревания в кипящей водяной бане.

Плотные среды для культивирования и выделения неклостридиальных анаэробов:

а) 5%-ный кровяной гемин-агар (вариант — с менадионом и гентамицином). Используется для культивирования анаэробных и микроаэрофильных бактерий в анаэростате. Для селективного выделения анаэробов добавляют гентамицина сульфат (или канамицин).

Состав:
• колумбийский (или сердечно-мозговой) агар 16-20,0 г,
• эритроцитарная масса (кровь) — 50 мл,
• раствор гемина солянокислого (гемоглобина) — 20 мл,
• менадион — 0,0005 г/л,
• дистиллированная вода — 1000 мл.
• pH (25°С) 7,1 ±0,2.

Приготовление:
Для приготовления среды предварительно (или одновременно) готовят солянокислый раствор гемина или гемоглобина. Для этого навеску солянокислого гемина (гемоглобина) растворяют в 100 мл дистиллированной воды из расчета 0,005 г/л. Доводят pH раствора до 7,1+0,2, добавляя по каплям 1-2 мл 0,1 N раствора NaOH и стерилизуют в автоклаве при 121°С — 15 мин. Для окончательного приготовления агаровой среды в дистиллированную воду добавляют питательную основу, навеску менадиона из расчета 0,0005 г/л и стерилизуют в автоклаве при 121°С 15 мин. Среду остужают до 50°С, перемешивая (встряхивая на шуттель-аппарате) для предупреждения образования агаровых сгустков, и в условиях стерильного бокса добавляют 50 мл крови или эритроцитарной массы (лошади, кролика или человека группы крови 0).
Быстро взбалтывают, стараясь избежать образования пузырей и пены, доливают приготовленный стерилизованный раствор гемина (гемоглобина) в количестве 20 мл, смешивают и разливают в стерильные чашки Петри. Для селективного выделения анаэробов в стерильную расплавленную среду перед разливом в чашки внести добавку — гентамицин (или канамицин) из расчета 50 мг/л. Навеску антибиотика предварительно разводят в 10 мл стерильной дистиллированной воды.

б) Анаэробный агар (по Уилкинсу-Фалгрену). Используется для выделения, культивирования, а также определения чувствительности к антимикробным препаратам для анаэробных бактерий методом разведения в агаре. Сухая среда фирмы «HiMedia» (Индия).

Состав:
• гидролизат казеина — 10,0 г,
• пептический перевар животной ткани — 10,0 г,
• дрожжевой экстракт — 5,0 г,
• глюкоза — 1,0 г,
• натрия хлорид — 5,0 г,
• гемин — 0,005 г,
• менадион — 0,0005 г,
• агар — 10,0 г.
• pH (25°С) 7,1 ±0,2.

Приготовление:
Размешать 43,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прогреть до кипения и полного растворения частиц. Разлить в соответствующую посуду. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Перед внесением антибиотиков остудить до 50°С. Осторожно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри. Для культивирования анаэробов в стерильную расплавленную среду перед разливом в чашки внести добавку — канамицин из расчета 50 мг/л (для выделения неспоровых анаэробов) и ванкомицин из расчета 20 мг/л (для выделения грамотрицательных анаэробов при необходимости). Навеску предварительно разводят в 10 мл стерильной дистиллированной воды.

в) Канамицин-ванкомициновый агар с гемолизированной кровью. Используется для селективного выделения неклостридиальных анаэробов, преимущественно бактероидов, порфиромонад и превотелл.

Состав:
• анаэробный агар, сухой (см. выше) — 16,0 г,
• кровь барана, лошади или кролика — 100,0 мл.
• pH (25°С) 7,3±0,2.

К 1000 мл охлажденного до 70°С анаэробного агара добавляют 50 мл крови, тщательно перемешивают и нагревают на водяной бане в течение 5 мин при температуре 80-90°С, непрерывно перемешивая. Затем остужают до 50°С и добавляют оставшиеся 50 мл крови, повторяя процедуру прогревания при температуре 80-90°С, непрерывно перемешивая. Перед внесением антибиотиков остужают до 50°С. Осторожно перемешивают, избегая образования пены и пузырей, разливают в стерильные чашки Петри.

Для селективного выделения анаэробов в стерильную расплавленную среду перед разливом в чашки внести добавку — канамицин из расчета 20 мг/л (для выделения неспоровых анаэробов) и ванкомицин из расчета 20 мг/л (для выделения грамотрицательных анаэробов). Навеску предварительно разводят в 10 мл стерильной дистиллированной воды.

г) Фенэтилалкоголь агар (Phenol-aethil-alcohol, PEA) с гемолизированной кровью. Используется для селективного выделения большинства видов облигатных анаэробов, но ингибирует рост грамотрицательных факультативных анаэробов (пропись CDC, США). Основой является соево-казеиновый агар, в которому добавляют фенилэтиловый спирт (10-15 об.%) и 5% крови.

Фенилэтанол подавляет рост большинства аэробных и факультативно-анаэробных грамотрицательных бактерий (в том числе протея). Хорошо растут грамположительные и грамотрицательные анаэробные бактерии, а также грамположительные аэробные бактерии и синегнойная палочка.

- Читать далее "Питательные среды для диагностики энтероклостридиоза диффициле (ЭКД)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.6.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.