Питательные среды для выделения, культивирования, идентификации нейссерий и моракселл

а) Сывороточный агар для культивирования и изучения нейссерий. К расплавленной и охлажденной до 45°С питательной агаровой основе добавляют 20 % нормальной сыворотки лошади или крупного рогатого скота, стерильной или с консервантом — хлороформом. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чаши Петри или в пробирки (для получения «скошенного» агара).

б) Селективная среда — сывороточный агар с линкомицином для выделения нейссерий и моракселл из отделяемого дыхательных путей, зева, носоглотки, среднего уха, глаза, мокроты и др. воспалительных жидкостей открытых полостей. К расплавленному и охлажденному до 45°С питательному агару добавляют 20% нормальной сыворотки и 0,5% рабочего раствора антибиотика линкомицина-гидрохлорида. Рабочий раствор содержит 1000 мкг/мл линкомицина. Конечная концентрация линкомицина в среде — 5 мкг/мл. Готовую среду разливают в чашки Петри. Среду с линкомицином используют отдельно или при одновременном посеве на кровяной агар без антибиотика, при этом селектвную среду засевают первой.

Сывороточные среды имеют кремово-желтый цвет (зависящий от цвета питательной агаровой основы), полупрозрачны.

в) Желточно-сывороточный агар для выявления способности нейссерий к образованию пигмента. К расплавленному и остуженному до А5°С питательному агару добавляют 10% нормальной сыворотки и 20% желточной смеси. После перемешивания среду разливают в чашки Петри.

Желточную смесь готовят ex temporae следующим образом. Асентично извлеченный из яйца желток помещают во флакон с 50,0 мл стерильного физиологического раствора с бусами; смесь тщательно взбалтывают. Среда непрозрачна, имеет желтый цвет. Испытуемые культуры засевают на среду в виде штрихов. После инкубации в термостате в течение 1 суток посевы просматривают на предмет образования желтого или зеленоватого пигмента. При нечетких результатах посевы оставляют при комнатной температуре на свету еще на одни сутки.

г) Среда Хъю-Лейфсона для выявления разложения углеводов у слабых кислотообразователей (нейссерии, моракселлы, неферментирущие бактерии и т.п.). Состав:
• пептон — 2,0 г,
• натрия хлорид — 5,0 г,
• калий фосфорнокислый двузамещенный К2НРO4-0,3 г,
• углевод — 10,0 г,
• агар — 3,0 г,
• бромтимоловый синий — 0,03 г (или индикатор Андреде — 20,0 мл),
• дистиллированная вода 1000,0 мл.

Приготовление:
В воде растворяют пептон, агар и хлористый натрий. После полного растворения агар-агара (при подогреве) в раствор добавляют двузамещенный фосфорнокислый калий и углевод. Смесь кипятят 2-3 минуты, доводят pH до 7,4-7,5 с помощью 20 %-ного раствора едкого натра. Доливают дистиллированной водой до первоначального объема и добавляют 3,0 мл 1%-го раствора бромтимолового синего или 20,0 мл индикатора Андреде. После фильтрации через ватно-марлевый фильтр среду разливают в пробирки по 5,0-7,0 мл и стерилизуют при 0,5 атм. 20 мин pH готовых сред — 7,1-7,2. Готовые среды с бромтимоловым синим — зеленые, с индикатором Андреде — розоватые. Посев культуры производят уколом.

При разложении углевода нейссерии начинают изменять цвет среды с верхней части столбика.

д) Среда с сахарозой для выявления способности нейссерий синтезировать полисахарид. Готовят стерильный питательный агар с добавлением 5% сахарозы. Перед употреблением к расплавленному и остуженному до 45-50-С агару добавляют 20% нормальной сыворотки лошади или крупного рогатого скота. После перемешивания среду разливают в чашки или пробирки (для скошенного агара). На поверхность застывшей агаровой среды засевают испытуемую культуру густыми штрихами (в случае использования чашки Петри — до 8 культур на чашку). После 48 часов инкубации в термостате на выросшую культуру наносят 1 каплю раствора Люголя. При положительном результате среда вокруг посева окрашивается в коричневый цвет за счет соединения йода с образовавшимся полисахаридом.

е) Среда с трибутирином (по М.Н. Зубкову, 2009) для дифференциации Moraxella catarrhalis и нейсерий, встречающихся у человека. Тест основан на гидролизе трибутирина (бутират глицерина) с образованием бутировой кислоты, изменяющей цвет индикатора.

Состав:
• трибутирин — 20,0 г,
• L-цистин — 0,5 г,
• натрия хлорид NaCl — 5,0 г,
• натрия сульфит Na2SO3 - 0,5 г,
• феноловый красный — 0,017 г,
• агар — 3,5 г,
• вода — 1000 мл.

Ингредиенты смешивают, растворяют в воде при слабом подогревании, разливают в пробирки по 3 мл. Стерилизуют при 121°С 15 мин, остужают среду в наклонном положении пробирок. Среда стабильна в течение 3 мес при температуре 2-8° С. Для засева скошенного агара берут большое количество агаровой бактериальной культуры. Инкубируют при 35°С 24 часа. При отрицательном результате инкубацию продлевают на 1 сутки (до 48 часов). Имеются коммерческие диски с трибутирином.

- Читать далее "Некоторые дифференциально-диагностические питательные среды для энтеробактерий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.6.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.