Питательные среды для диагностики энтероклостридиоза диффициле (ЭКД)

Плотные питательные среды:

а) Плотная селективная среда для С. difficile — ПССЭ.

Состав:
• Na2HPO4 • 2 Н2O - 10,0 г/л,
• сухая среда для контроля стерильности (ГИСК им. Тарасевича) — 33,0 г/л,
• пептон «Д» (Ростовский ПЧИ) — 5,0 г/л,
• экстракт дрожжевой сухой — 4,0 г/л,
• тиогликолят натрия — 0,1 г/л,
• твин-80 - 10,0 г/л,
• агар — 10,0 г/л,
• баранья кровь — 50,0 г/л,
• 20%-ный раствор глюкозы — 25 мл,
• циклосерин 0,25 г/л + цефокситин 0,008 г/л.

Смесь компонентов 1-7 при pH 7,4-7,6 стерилизуют при 121°С в течение 20 минут. Стерильный раствор глюкозы, кровь и антибиотики добавляют ex temporae.

б) Среда George (CCFA).

Состав:
• протеозо-пептон № 2 («Difco») — 40,0 г/л,
• Na2HPO4 • 2 Н2О - 5,0 г/л,
• К2НРО4 - 1,0г/л,
• NaCl — 2,0 г/л,
• MgSO4 - 0,l г/л,
• фруктоза — 6,0 г/л,
• агар — 20,0 г/л,
• 0,1%-ный спиртовой раствор нейтрального красного — 3,0 мл,
• циклосерин — 0,5 г/л,
• цефокситин — 0,016 г/л.

Смесь компонентов 1-8 при pH 7,4-7,6 стерилизуют при 121°С в течении 20 минут. Последние два компонента добавляют ex temporae.

в) Сердечно-мозговой агар (СМА) с антибиотиками, сухой («Difco»).

Растворить 52,0 г готовой среды в 1 л дистиллированной воды, нагреть до кипения, охладить. Простерилизовать при 121°С 20 минут.

Перед употреблением добавить смесь антибиотиков: циклосерин 0,5 г и цефокситин 0,016 г. Разлить в чашки Петри.

Жидкие питательные среды:

а) Среда для токсинообразования С. difficile - СТД.

Состав:
• Na2HPO4 • 2 Н2O - 10,0 г/л,
• крахмал растворимый — 5,0 г/л,
• аминопептид — 25,0 г/л,
• пептон «Д» (Ростовский ПЧИ) — 5,0 г/л,
• экстракт дрожжевой сухой (ЭКД) — 10,0 г/л,
• тиогликолевая кислота — 0,3 г/л.

б) Сердечно-мозговой бульон.

Состав:
• Na2HPO4 • 2 Н2O - 6,5 г/л,
• дрожжевой экстракт («Difco») — 5,0 г/л,
• сердечно-мозговой бульон, сухой («Difco») — 35,0 г/л,
• тиогликолевая кислота — 0,3 г/л.

в) Мясной бульон с гемином («Difco»).

Состав:
• сухой мясной бульон («Difco») — 37,5 г/л,
• сердечно-мозговой экстракт («Difco») — 17,5 г/л,
• дрожжевой экстракт («Difco») — 6,0 г/л,
• раствор гемина или менадиона («Difco») — 1%.

Приготовление:
Отдельно готовят стерильную жидкую среду без добавления раствора гемина и менадиона.

Готовят растворы:
№1 — рабочий раствор гемина
• 50,0 мг гемина в 1 мл 1М NaOH
• дистиллированная вода — 100 мл Стерилизовать при 115°С — 15,0 мл №2 — рабочий раствор менадиона
• менадион 100,0 мг
• спирт этиловый 95"С — 20,0 мл Стерилизовать путем фильтрации.

К 100 мл раствора № 1 добавляют 1 мл раствора №2. Полученную смесь стерильно добавляют к жидкой среде из расчета 1% по объему.

Во все три среды с pH 7,4-7,6 добавляют кусочки вареной печени, стерилизуют при 121°С 20 минут, разливают в пробирки и флаконы, наслаивают стерильное вазелиновое масло слоем в 0,5 см и используют для токсинообразования. Эти же жидкие среды можно использовать в качестве селективных сред накопления при добавлении к ним циклоссрина (250,0 мкг/л) и цефокситина (8,0 мкг/л).

- Читать далее "Диагностические питательные среды для грибов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.6.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.