а) Висмут-сульфитный агар Вильсона и Блера. Коммерческая среда, выпускаемая отечественными и зарубежными производителями. Используется для селективного выделения и предварительной идентификации (по характерным черным колониям) сальмонелл из фекалий, мочи, сточных вод, пищевых продуктов, воды и другого исследуемого материала.

Приготовленная среда бесцветная, молочно-мутная, pH 8,0-8,1. Среду не стерилизуют, разливают в чашки Петри, подсушивают в термостате. Просмотр чашек с посевами проводят через 24 и 48 ч.

Дифференцирующее действие среды основано на том, что образуемый сальмонеллами из сульфата железа сероводород вызывает почернение индикатора — бесцветного висмута, переходящего в сульфид висмута — вещество черного цвета, поэтому бактерии, продуцирующие сероводород, образуют различного вида колонии с черной окраской:
• сальмонеллы дают влажно-слизистые, слегка выпуклые колонии черного цвета с темным ореолом и почернением среды под колонией;
• кишечные палочки вырастают редко, их колонии имеют коричневый оттенок;
• колонии дизентерийных бактерий на среде не растут.

б) Среда с мочевиной по Преусу (для определения уреазы). Среда предназначена для дифференциальной диагностики энтеробактерий и других микроорганизмов.

Состав:
• мочевина, 50% -ный стерильный водный раствор — 20,0 мл,
• глюкоза — 5,0 г,
• агар — 15,0 г,
• бромтимоловый синий — 0,02 г,
• Питательный бульон (желательно на переваре Хоттингера) — 1000,0 мл.
• pH 6,95-7,25.

Раствор мочевины готовят отдельно. Навеску растворяют в дистиллированной воде и стерилизуют путем кипячения в водяной бане в течение 30 мин Остальные ингредиенты растворяют в бульоне при нагревании, устанавливают pH. Стерилизуют при 112°С — 30 мин К стерильной среде асептически добавляют раствор мочевины. Разливают в пробирки, скашивают. Цвет готовой среды светло-зеленый.

в) Среда Симмонса с цитратом (для выявления способности утилизировать цитрат, как единственный источник углерода).

Состав:
• натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г,
• магний сернокислый MgSO₄*7H₂O - 0,2 г,
• фосфорнокислый аммоний однозамещенный NH₄H₂PO₄*5Н₂O - 1,0 г или (NH₄)₂НРO₄ - 1,5 г или NaNH₄H₂PO₄ - 1,5 г,
• фосфорнокислый калий двузамещенный К₂НРО₄ - 1,0 г,
• натрия цитрат C₆H₅O₇Na₃ кристаллический — 2,77 г или C₆H₅O₇Na₃ • 5Н₂O - 3,0 г,
• 1,5%-ный спиртовой раствор бромтимолового синего — 10,0 мл,
• агар 20,0 г,
• вода дистиллированная — 1000,0 мл.

Приготовление:

Навески сухих ингредиентов растворяют в 1000,0 мл воды. Устанавливают pH 7,2. Добавляют 10 мл спиртового раствора бромтимолсинего. Фильтруют через вату, разливают в пробирки по 4,0-5,0 мл, автоклавируют при 121°С 15 минут. Цвет готовой среды — оливковый (зеленоватый). При положительном результате цвет засеянной среды становится синим за счет появления щелочного карбоната натрия Na₂CO₃ из цитрата, как единственного источника углерода. Источником азота в среде является фосфорнокислый аммоний. При отрицательном результате рост многих микроорганизмов вообще отсутствует.

г) Тест с KCN. Используется для предварительной дифференциации шигелл, сальмонелл и эшерихий от энтеробактерий других родов.

Состав среды.
• пептон — 10,0 г,
• хлористый натрий — 5,0 г,
• КН₂РO₄ —0,225 г,
• Na₂PO₄ — 5,64 г,
• вода дистиллированная — до 1000 мл.
• рН 7,0±0,1.

Среду автоклавируют во флаконах. К охлажденной среде добавляют 15 мл 0,5%-ного раствора KCN. Среду разливают по 1 мл в стерильные пробирки, которые быстро закрывают корковыми пробками стерилизованными прогреванием в парафине. В таких пробирках среда может сохраняться в течение двух недель при +4°С. Пробирки засевают одной петлей суточной бульонной культуры, выращенной при +37°С. Для контроля все штаммы засевают в пробирки с той же средой, но без KCN. Пробирки инкубируют при +37°С и просматривают ежедневно в течение 4 дней. Шигеллы, сальмонеллы и эшерихии дают отрицательную пробу с KCN.

- Читать далее "Дифференциально-диагностические среды для выделения, идентификации бактерий рода Pseudomonas, Burkcholderia и Stenotrophomonas"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.6.2020