Питательные среды для выделения и культивирования микобактерий

а) Среда Левенштейна-Иенсена. Состав:

1. Раствор минеральных солей:
• калий однозамещенный фосфорнокислый КН2РO4-2,4 г,
• магний сернокислый MgSO4 • 7H2O — 0,24 г,
• магний лимоннокислый — 0,6 г,
• L-аспарагин — 3,6 г,
• глицерин — 12 мл,
• вода дистиллированная — 600 мл.

Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Затем стерилизуют в автоклаве 30 минут при 121°С. Срок хранения раствора составляет 3-4 недели при комнатной температуре.

2. Раствор малахитового зеленого:
• малахитовый зеленый — 2,0 г,
• стерильная дистиллированная вода — 100 мл.

Растворить в стерильной дистиллированной воде малахитовый зеленый, поместив раствор в термостат на 1-2 часа. При необходимости профильтровать через бумажный фильтр. Приготовленный раствор не подлежит длительному хранению, и при появлении осадка или при изменении окраски его следует заменить свежим раствором. Стерилизовать при 121°С 30 минут.

3. Яичная масса:
Свежие диетические куриные яйца со сроком хранения не более 7 суток без дефектов скорлупы тщательно отмывают в теплой проточной воде с помощью ручных щеток и щелочного мыла, затем оставляют на 30 минут в мыльном растворе. Тщательно промывают в проточной воде и погружают в 70° этиловый спирт на 30 минут. Затем в стерильном боксе разбивают яйца стерильным ножом в стерильную посуду, доводя общий объем яичной массы до 1 л (для этого требуется в среднем 20-25 яиц в зависимости от их величины). Тщательно взбивают стерильным венчиком или в стерильном миксере.
Приготовление среды:
В большую стерильную емкость, соблюдая правила асептики, помещают следующие растворы:
Раствор минеральных солей — 600 мл,
Гомогенизированная яичная масса — 1000 мл.

Тщательно перемешивают и фильтруют через четырехслойный стерильный марлевый фильтр. Добавляют 20 мл раствора малахитового зеленого, тщательно перемешивают, избегая образования пены, и в течение не более 15 мин разливают в пробирки приблизительно по 5 мл, следя за тем, чтобы в растворе не сформировался осадок.

Свертывание среды:
Для свертывания среды используются специальные аппараты — свертыватели типа «АСИС». Пробирки с разлитой в них средой помещают в специальные штативы с подобранным углом наклона для формирования скошенной среды. Штативы устанавливают в свертыватель и проводят коагуляцию при 85°С в течение 45 минут. Приготовление питательной среды проводится в условиях соблюдения асептики, так как свертывание является не стерилизующей, а лишь коагулирующей процедурой.

Качество приготовленной яичной среды зависит от соблюдения температурного и временного режимов коагуляции. Обесцвечивание среды, наличие пузырьков или углублений на ее поверхности свидетельствует о нарушении режима свертывания. Повторное свертывание также ухудшает качество среды. Среды с нарушенным режимом свертывания подлежат удалению.

б) Среда Финна-2 для микобактерий. Состав:

1. Раствор минеральных солей
• магний сернокислый MgSO4*7H2O — 0,5 г,
• натрий лимоннокислый C6H3O7Na*5,5H2O — '0,1 г,
• квасцы железоаммонийные Fe (NH4)*(SO4)*12H2O — 0,05 г,
• калий однозамещенный фосфорнокислый КН2РO4-20,0 г,
• аммоний лимоннокислый однозамещенный C8H11O7N — 5,0 г,
• натрий глутаминовокислый однозамещенный — 10,0 г,
• глицерин — 20,0 мл,
• вода дистиллированная до 1000 мл.

Все минеральные соли растворяют в воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Стерилизуют при 120°С — 30 мин. Хранить 3-4 нед при комнатной температуре.

2. Раствор малахитового зеленого (см. выше)

3. Яичная масса (см. выше)

Приготовление готовой среды, ее свертывание и хранение — так же, как и среды Левенштейна-Йенсена.

- Читать далее "Питательные среды для выделения, культивирования, идентификации нейссерий и моракселл"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 8.6.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.