Среды для выделения и культивирования бруцелл

а) Среда транспортная бруцеллезная жидкая. Основой среды является бульон Альбими, к которому добавляют 0,5% натрия лимоннокислого, 1% глюкозы, 0,5% натрия хлорида, 2% глицерина. Среду разливают по 5,0 мл во флаконы емкостью 15,0 мл, стерилизуют при температуре 116°С в течение 15 мин.

б) Печеночные среды:

1. Печеночный настой. Свежую говяжью печень освобождают от жира и пленок и пропускают через мясорубку. Фарш заливают водопроводной водой (на 1,0 кг фарша 1,0 л воды) и настаивают при температуре 25-30°С в течение 3 ч или при температуре 4-10°С в течение 6-10 ч. После этого эту смесь перемешивают и варят в автоклаве текучим паром в течение 20 мин. Можно варить и в котле, постоянно помешивая. В процессе варки снимают накипь, вновь все перемешивают и доваривают еще около 2 ч. После варки настой фильтруют через тонкий ватно-марлевый фильтр. Приготовленный таким образом печеночный настой разливают по бутылям и стерилизуют в течение 20 мин при температуре 115-120°С.

2. Печеночный бульон. К 500,0 мл печеночного настоя добавляют 500,0 мл водопроводной воды, 10,0 г сухого пептона и 5,0 г химически чистого натрия хлорида. Смесь кипятят, устанавливают pH 7,4, фильтруют через фильтровальную бумагу и стерилизуют 20 мин при температуре 115-120°С. После стерилизации устанавливают pH бульона 7,1-7,2.

3. Печеночный агар. К 500,0 мл печеночного настоя добавляют 500,0 мл водопроводной воды, 10,0 г сухого пептона, 5,0 г химически чистого хлорида натрия и 25,0 г агара, промытого водопроводной водой и хорошо отжатого. Устанавливают pH среды 7,8. Среду варят до полного расплавления агара и разливают в необходимую посуду. В дальнейшем ее автоклавируют при температуре 115°С в течение 20 мин, отстаивают, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, предварительно смоченный теплой водой, и вновь устанавливают pH 7,1-7,2. Среду разливают в емкости и стерилизуют при температуре 115°С в течение 20 мин.

4. Агар с печеночной вытяжкой, сухой, HiMedia, Liver Infusion Agar. Состав:
Вытяжка из говяжьей печени — 500,0 мл
Протеозный пептон — 10,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г
Агар — 10,0 г
pH 6,9±0,2

Суспендируют 55,0 г сухой среды в 1000,0 мл дистиллированной воды. Кипятят до полного растворения частиц. Стерилизуют при 121°С 15 мин.

Среда одинаково пригодна для выделения всех видов бруцелл: В. melitensis, В. suis, В. abortus, дающих на среде отличный рост. При выделении возбудителя из клинического материала признаки микробного роста часто появляются с опозданием (через 1,5-2,5 нед.). При пассировании культуры типичные колонии бруцелл образуются через 18-48 ч.

в) Мясопептонные среды:

1. Сывороточно-декстрозный агар. Основой среды является питательный агар, который готовят следующим образом: к 835,0 мл дистиллированной воды добавляют 15,0 г агара, 10,0 пептона, 5,0 г химически чистого хлористого натрия и 165,0 мл мясной воды.

Все ингредиенты помещают в сосуд и подвергают обработке текучим паром в течение 1 ч. Устанавливают pH 7,8. Затем сосуд ставят в автоклав и подвергают одномоментной обработке при температуре 121°С для выпадения в осадок фосфатов. Среду фильтруют через бумажные фильтры, устанавливают pH 7,4, а затем разливают в мерную посуду и стерилизуют при температуре 116°С в течение 15 мин.

Заготовленный таким образом питательный агар по мере надобности расплавляют на водяной бане или в автоклаве и охлаждают до 50°С. Затем к нему добавляют нормальную инактивированную (при 56°С 30 мин) лошадиную или бычью сыворотку и раствор декстрозы, предварительно простерилизованный путем фильтрации через мембранные фильтры так, чтобы окончательная концентрация сыворотки была 5% и декстрозы — 1%.

2. Агар Альбими. К 1000,0 мл дистиллированной воды добавляют 20,0 сухого пептона, 20,0 мл дрожжевой воды, 5,0 г химически чистого натрия хлорида и 20,0 г агара, устанавливают pH 7,3.

Все ингредиенты растворяют в автоклаве под текучим паром и фильтруют через ватно-марлевый фильтр (предварительно смоченный теплой водой и хорошо отжатый). Добавляют 1,0 г глюкозы и 0,1 г бисульфита натрия (NaHSO4), устанавливают pH 7,2-7,3. Разливают в небольшую посуду и стерилизуют 40 мин под текучим паром, а потом при температуре 110°С в течение 20 мин.

Дрожжевая вода. 1,0 кг хлебный дрожжей и 1000,0 мл дистиллированной воды кипятят до растворения. Затем фильтруют через полотняный фильтр. Хранят под хлороформом в темноте не более 2 нед.

3. Среда для культивирования В. ovis. Основой среды является печеночный, мясопептонный агар или агар Альбими, к которым добавляют \% декстрозы (глюкозы) и 2% глицерина. Среду разливают в необходимую посуду и стерилизуют при температуре 116°С в течение 15 мин.

Перед посевом к расплавленной и остуженной до 50°С среде добавляют 20% нормальной сыворотки крупного рогатого скота или 10% «Аминопептида» и 10% сыворотки.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 2.3.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.