а) Среды накопления (подращивания):

1. Пептонно-калиевая среда. Состав:
Пептон ферментативный — 10,0 г
Калий фосфорно-кислый двузамещенный (K₂HPO₄*3H₂O) — 0,01 г
Вода дистиллированная — 1000,0 мл

Компоненты растворяют в воде, кипятят 2-3 мин, доводят pH среды до 7,6-7,8. Среду стерилизуют автоклавированием 20 мин при 112°С. Хранят при 4-7°С в течение 7-10 дней.

2. Буферная пептонная вода. Состав:
Фосфатно-буферный раствор — 990,0 мл
Пептон — 10,0 г
pH 7,6-7,8

Пептон растворяется в фосфатно-буферном растворе, разливают в пробирки по 5 мл, среду стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 мин. Среду хранят в холодильнике, используют в течение 7-10 сут.

3. Буферно-казеиново-дрожжевая среда (БКД). Состав:
Гидролизат казеина средней степени расщепления, сухой — 2,0 г Экстракт пекарских дрожжей — 5,0 мл
Фосфатно-буферный раствор (до общего объема) — 1000,0 мл
pH 7,6-7,8

Гидролизат казеина выпускает Дагестанское НПО «Питательные среды». Экстракт пекарских дрожжей готовят в лаборатории. Для этого к 500,0 г дрожжей, предварительно размягченных до гомогенной массы в фарфоровой ступке в малом объеме, добавляют 1 л дистиллированной воды. Взвесь сливают в колбу и кипятят в течение 60 мин на медленном огне при помешивании. Взвесь выдерживают при 4-10°С в течение 16-18 ч, надосадочную жидкость сливают и фильтруют через широкопористый бумажный фильтр. Приготовленный дрожжевой экстракт разливают во флаконы и стерилизуют при 112°С в течение 30 мин. Экстракт хранят в холодильнике при 4-10°С в течение 12 мес.

б) Плотные питательные среды:

1. Дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения возбудителей иерсиниоза и псевдотуберкулеза, сухая (СБТС). Состав, г/л:
Панкреатический гидролизат рыбной муки — 23,0
Желчь очищенная сухая — 4,0
Глюкоза — 10,0
Мочевина — 5,0
Натрий хлористый — 5,4
Бромтимоловый синий — 0,128
Агар — 11,0
Дистиллированная вода — 1000,0 мл

Препарат в количестве, указанном на этикетке, размешивают в 1 л дистиллированной воды, нагревают до кипячения и кипятят на медленном огне в течение 5 Mini. Среду охлаждают до 45-50°С, разливают по чашкам Петри, закрывают крышками и оставляют для застывания при температуре 18-25°С на 30-40 мин. Готовая среда в чашках плотная, прозрачная сине-зеленого цвета.

Среда, разлитая в чашки Петри, хранится не более 2 сут. в холодильнике при температуре 2-8°С.

Анализ результатов производят через 24-48 ч инкубации при температуре 28±1°С. Y. pseudotuberculosis растут на этой среде в виде зеленовато-синих сухих колоний с фестончатым краем диаметром не менее 1,0 мм.

Колонии Y. enterocolitica круглые блестящие сине-зеленого цвета диаметром не менее 1,5 мм. Колонии других уреазоположительных бактерий (клебсиелл, протеев) — расплывчатые жирные, окрашены в голубой или синий цвет.

Энтеробактерии (сальмонеллы, эшерихии, шигеллы), расщепляющие глюкозу, образуют выпуклые сочные ярко-желтого цвета колонии с пожелтением среды. Рост стафилококков полностью подавлен.

Промышленный выпуск среды осуществляет ФГУН ГНIУ прикладной микробиологии (г. Оболенск, Московской обл.).

2. Реактив для щелочной обработки (при повторном посеве материала). Состав:
Раствор а — 40%-ный раствор калия гидроксида:
Калия гидроксид (КОН) — 400,0 г
Вода дистиллированная — 1000,0 мл
Раствор б — 0,5%-ный раствор натрия хлорида:
Натрия хлорид (NaCl) — 5,0 г
Вода дистиллированная — 1000,0 мл

Оба раствора готовят отдельно. Стерилизуют в автоклаве при 112°С 30 мин. Хранят в холодильнике.

Перед началом работы ex tempore смешивают 9,5 мл 0,5%-ного раствора натрия хлорида и 0,19 мл 40%-ного раствора калия гидроксида. Щелочной раствор должен быть прозрачным.

- Читать далее "Транспортная среда и среды для выделения возбудителя чумы"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 2.3.2020