Среды для выделения и культивирования Helicobacter pylori

а) Среда 94 (В.Г. Жуховицкий и соавт., 1991):

1. Питательная основа:
Агар Tryptose (Ferak, Германия) — 10,0 г
Casaminoacids (Difco, США) — 5,0 г
Питательный бульон, сухой (Difco, США) — 5,0 г
Бактоагар (Difco, США) — 9,0 г
Крахмал (Merk, Германия) — 1,0 г
Дистиллированная вода — 1000,0 мл

Питательную основу готовят путем смешивания соответствующих навесок в дистиллированной воде, расплавляют на кипящей водяной бане и стерилизуют в автоклаве при 121°С 15 мин.

Основа среды 94 может быть с успехом заменена Колумбийским агаром (bioMerieux, Франция)

2. Селективная добавка:
Ванкомицин (Sigma, США) — 6,0 мг
Налидиксовая кислота (Sigma, США) — 20,0 мг
Амфотерицин В (Sigma, США) — 4,0 мг

3. Дифференциально-диагностическая добавка:
Трифенилтетразолиумхлорид — 40,0 мг

4. Биологическая добавка:
Кровь лошадиная дефибринированная лизированная стерильная — 7 мл

Лизированная кровь получается при оттаивании замороженной дефибринированной крови, хранившейся в течение 1 мес. в морозильной камере бытового холодильника. Хранить размороженную лизированную кровь не рекомендуется, ее необходимо использовать немедленно.

К расплавленной и охлажденной до 50°С питательной основе добавляют смесь селективной и дифференциально-диагностической добавок в стерильной дистиллированной воде, а также размороженную ex tempore гемолизированную кровь.

Питательную среду немедленно разливают по вентилируемым пластиковым чашкам однократного применения либо по стерильным стеклянным.

В процессе роста H.pylori восстанавливает хлорид трифенилтетразолия из бесцветной (окисленной) формы в рубиново-красную (восстановленную). Пигментируется центральная часть изолированных колоний, а также область скученного роста изолированных колоний или зоны сплошного роста культуры и окружающие участки питательной среды. В последнем случае окраска в виде штрихов переходит с колоний на питательную среду.

Способностью к восстановлению трифенилтетразолия хлорида обладают и некоторые другие микроорганизмы, но H.pylori стимулирует образование лишь свойственного ему специфического пигмента.

Содержащиеся в питательной среде антибиотики (ингибитор кокковой флоры ванкомицин, бактерий кишечной группы — налидиксовая кислота и фунгостатик амфотерицин В) ингибируют рост сопутствующей микрофлоры желудка, состав которой при гипацидных или, тем более, анацидных состояниях выглядит достаточно пестрым.

б) Основа Колумбийского кровяного агара (с 1% агара), HiMedia, Columbia Blood Agar Base (with 1% of agar). Состав, г/л:

Перевар казеина панкреатический — 12,0
Перевар казеина кислотный — 5,0
Экстракт дрожжевой — 3,0
Экстракт мясной — 3,0
Крахмал растворимый — 1,0
Натрия хлорид — 5,0
Агар — 10,0
pH 7,3±0,2

Навеску 39,0 г растворяют в 1000,0 мл дистиллированной воды. Стерилизуют 15 мин при 121°С. Охлаждают до 45-50°С и вносят 5-7% дефибринированной крови и селективную добавку для Helicobacter (см. предшествующий рецепт).

- Читать далее "Среды для выделения, культивирования, идентификации и хранения кампилобактеров"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 2.3.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.