а) Транспортная среда Кэри-Блэра, сухая, HiMedia, Cary-Blair Medium. Состав, г/л:
Натрий гидрофосфат — 1,1
Натрия хлорид — 5,0
Агар — 5,0
Вода дистиллированная — 1000,0 мл
pH 8,4±0,2

Навеску сухой среды 12,6 г суспендируют в 1000,0 мл воды, нагревают до полного растворения частиц. Охлаждают до 50°С, добавляют 9 мл 1%-ного раствора кальция хлорида. При необходимости доводят pH до 8,4. Разливают по маленьким флаконам с завинчивающимися крышками и стерилизуют текучим паром 15 мин. После остывания среды крышки плотно завинчивают для предотвращения высыхания.

Низкий окислительно-восстановительный потенциал среды способствует длительному выживанию бактерий. Жизнеспособные формы Y.pestis на ректальных тампонах в среде Кэри-Блэра могут находиться в течение многих дней.

б) Среды для выделения возбудителя чумы:

1. Среда с кровью и генциан-виолетом (по В.М.Туманскому). К 100,0 мл растопленного и охлажденного до 45-50°С агара Хоттингера или Мартена, pH 7,0-7,2, прибавляют 1,0 мл лизированной крови и 0,5-1,0 мл спиртоводного раствора генциан-виолета в концентрации, установленной путем предварительной проверки данной серии красителя, которая обеспечивает его необходимое количество по отношению к взятому объему агара.

2. Среда с сульфитом натрия и генциан-виолетом (по Г.Н. Ленской). К 100,0 мл растопленного и охлажденного до 45-50°С агара Хоттингера, Мартена, казеинового или мясопептонного, pH 7,0-7,2, добавляют 1,0 мл свежеприготовленного 2,5%-ного раствора безводного сульфита натрия (Na₂SO₃) и 0,5-1,0 мл спиртоводного раствора генциан-виолета в концентрации, установленной путем предварительной проверки данной серии генциан-виолета, которая обеспечивает его необходимое количество по отношению к взятому объему агара.

3. Агар с антифаговой сывороткой. Предлагается два варианта:

а) На агаровую пластинку перед посевом наносят 1-2 капли цельной антифаговой сыворотки (0,05-0,1 мл) и тщательно растирают ее стеклянным шпателем по всей поверхности агара. Чашкам дают постоять 15-30 мин, чтобы сыворотка впиталась в агар и его поверхность приняла требуемый для посева вид. Посевы на такой агар производят общепринятым способом.

б) Антифаговую сыворотку вносят в расплавленный и остуженный до 45°С агар в количестве 0,5% но отношению к объему агара, который после этого разливают по чашкам и подсушивают, как обычно.

Некоторые авторы предлагают вводить антифаговую сыворотку в исследуемый материал и эту смесь, после выдерживания в течение 2-24 ч на холоде, высевать на питательные среды или вводить лабораторному животному. Лучшие результаты были получены при более длительном выдерживании такой смеси на холоде.

4. Среда Коля-Белькура. К 100,0 мл расплавленного и охлажденного до 45-50"С любого питательного агара (Хоттингера, Мартена, сухого агара Иркутского противочумного института), pH 7,0-7,2, прибавляют 2,0 мл стерильного химически чистого глицерина. Затем в агар вносят 1-5,0 мл стерильного раствора лакмуса или такое же количество реактива Андреде. Агар хорошо перемешивают и разливают в чашки Петри.

Глицерин можно прибавить к агару перед стерилизацией, разлить агар мерно во флаконы по 100-150,0 мл и стерилизовать под давлением (110°С 30 мин). В таком случае перед разливкой агара в чашки в него прибавляют только лакмусовую настойку или реактив Андреде.

Примечание. Оптимальное количество лакмусовой настойки, требуемое для среды, рассчитывают титрацией препарата начиная с 0,5 мл в 100,0 мл растопленного агара с глицерином для получения фиолетового окрашивания при абсолютно прозрачном агаре.

5. Питательный агар для выращивания чумного микроба, сухой (Иркутский НИПЧИ Сибири и Дальнего Востока). Состав:
Панкреатический гидролизат казеина — 15,0 г
Натрия хлорид — 5,0 г
Натрия фосфат двузамещенный — 1,0 г
Натрия метабисульфит — 0,3 г
Агар — 18,0 г
Вода дистиллированная — 1000,0 мл
pH 7,2±0,1

39,3 г порошка размешивают в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения, кипятят до полного расплавления агара (2-3 мин), фильтруют через ватно-марлевый фильтр. После разлива автоклавируют в течение 20 мин при 121°С, охлаждают до 50°С, разливают в чашки Петри, после чего подсушивают при комнатной температуре в течение 40 мин.

Среда предназначена для выращивания возбудителя чумы, который через 24 ч формирует на среде типичные колонии в виде «кружевных платочков».

- Читать далее "Питательные среды для идентификации возбудителя чумы"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 2.3.2020