Среды для выделения, культивирования, идентификации и хранения кампилобактеров

Для выделения возбудителей кампилобактериоза используют плотные питательные среды, обогащенные кровью (5-10% крови барана, кролика, лошади или человека, без добавления консервантов) с содержанием 3-5 антибактериальных и противогрибковых препаратов, подавляющих рост нормальной флоры кишечника.

а) Селективная среда для выделения кампилобактерий — железо-эритригный кровяной агар (ЖЭКА). Состав основы:
Эритрит агар (сухой) — 36,0 г
Экстракт кормовых дрожжей — 4,0 г
Сернокислое железо (FeSO4*7H2O) — 0,04 г
Вода дистиллированная — до 1000,0 мл
pH 7,2±0,2

Ингредиенты размешивают в 1000,0 мл дистиллированной воды, доводят до кипения и кипятят 2-3 мин до полного растворения. Среду разливают по 200,0 мл в колбы или флаконы и стерилизуют автоклавированием 20 мин при 121°С.

В остуженную до 50-55°С питательную основу вносят аэротолерантную добавку (метабисульфит натрия — 0,1 г/л и пируват натрия — 0,25 г/л), гемолизированную баранью, лошадиную кровь — 7%, селективную добавку (амфотерицин В — 3,0 мг, фузидин натрия — 10,0 мг, цефалотин — 15,0 мг, рифампицин — 20,0 мг). Разливают в чашки Петри по 15-20,0 мл.

б) Железо-эритрит-кровяной агар (ЖЭКА), сухой. Среда предназначена для выделения кампилобактерий.

Состав основы, г/л:
Гидролизат кильки — 17,9
Эритрит — 0,0122
Тиаминбромид — 0,005
Железа закисного сульфат — 0,04
Экстракт кормовых дрожжей — 4,0
Глюкоза — 1,0
Натрия хлорид — 5,9
Натрия карбонат — 2,5
Агар — 11,2
Вода дистиллированная — 1000,0 мл
pH 7,3±0,2

Навеску препарата, указанную на этикетке, размешивают в 1000,0 мл дистиллированной воды, кипятят в течение 1-2 мин до полного растворения агара, стерилизуют при 121°С 20 мин. Перед употреблением среду расплавляют, охлаждают до 45-50°С, добавляют «лаковую кровь» и раствор смеси антибиотиков (№1 или №2).

Среды для выделения, культивирования, идентификации и хранения кампилобактеров

Для приготовления «лаковой крови» к 20,0 мл дефибринированной крови животных или человека добавляют 46,0 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Среду можно хранить в холодильнике до 14 дней. Перед употреблением чашки подсушивают 40-60 мин в термостате при 37"С.

Бактерии рода Campylobacter на плотных питательных средах образуют колонии без гемолиза двух типов. Чаще встречается плоская форма колоний с ровными краями диаметром 2-8 мм. Колонии бесцветные или светло-серого цвета, гомогенные, напоминающие капли жидкости, расплескавшейся по поверхности агара. Колонии второго типа — мелкие (1,0-2,0 мм в диаметре) круглые с ровными краями, гладкие блестящие, заметно возвышающиеся над поверхностью, гомогенные, бесцветные, приобретающие желтоватый оттенок при длительном культивировании. Выпускается коммерческая отечественная среда.

в) Мясопептонно-печеночный полужидкий агар (МПППА). Среда может быть использована для обнаружения и кратковременного хранения культур, а также проведения температурного теста.

Состав:
Мясная вода — 250,0 мл
Печеночный отвар — 250,0 мл
Пептон бактериологический —10,0 г
Хлорид натрия NaCl — 5,0 г
Агар — 1,6 г
Вода дистиллированная — 500,0 мл
pH 7,3+0,1

После растворения всех ингредиентов и расплавления агара устанавливают pH. При необходимости среду фильтруют, стерилизуют при 121°С 20 мин, охлаждают до 45-50°С и разливают по 5,0-7,0 мл в пробирки. Кампилобактер сохраняет жизнеспособность в этой среде до 6-7 сут.

В пробирочных полужидких средах кампилобактер образует зону роста в виде диска на глубине 1,0-2,0 мм от поверхности среды.

г) Модифицированная (полужидкая) среда для теста редукции нитратов. Состав:
Триптоза («Мегк») — 20,0 г
D-глюкоза — 1,0 г
Натрия фосфат однозамещенный (NaH2PO4) безводный — 2,0 г Калия нитрат (KNO3) — 1,0 г
Агар — 1,0 г
Дистиллированная вода — до 1000,0 мл
pH 7,2±0,2

Среду после приготовления разливают в пробирки по 9-10,0 мл и стерилизуют при 112°С 30 мин. Посевы инкубируют при 37°С в течение 72 ч в аэробных условиях. Учет результатов — по общепринятой методике.

д) Модифицированная среда для теста продукции сероводорода. Состав:
Дрожжевой экстракт — 3,0 г
Пептон — 20,0 г
Натрия хлорид (NaCl) — 3,0 г
Агар — 15,0 г
Железа (III) аммоний цитрат — 0,18 г
Натрия тиосульфат (Na2S2O3) безводный — 0,18 г
Глюкоза — 0,6 г
Феноловый красный (0,2%-ный водный раствор) — 12 мл
Дистиллированная вода — до 1000 мл
pH 7,0-7,1

Готовую среду разливают в пробирки по 7 мл, стерилизуют при 112°С 30 мин и скашивают в горячем виде. Учет — по наличию или отсутствию почернения среды в нижней части пробирки (в месте соприкосновения среды и конденсата).

е) Криоконсервант для низкотемпературного замораживания чистых культур кампилобактерий и аркобактеров (пропись H.Lior). Состав:
Пептон ферментативный — 1,0 г
Глицерин — 25,0 мл
NaCl - 0,5 г
Вода дистиллированная — 75,0 мл
pH 7,2

Криопротектор стерилизуют автоклавированием при 121°С 15 мин.

ж) Модифицированная среда для лиофилизации штаммов кампилобактерий и аркобактеров (на 100,0 мл готовой среды). Состав:
Фетальная телячья сыворотка — 50,0 мл
Уголь активированный бактериологический — 2,0 г
Желатина (10% раствор) — 50,0 мл
Среду стерилизуют автоклавированием при 121°С 15 мин.

- Читать далее "Среды для выделения, культивирования, идентификации и хранения бордетелл — возбудителей коклюша"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 2.3.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.