Тест на дезаминирование фенилаланина в идентификации микроорганизмов
Кроме декарбоксилаз в ферментативном расщеплении аминокислот могут принимать участие ферменты дезаминазы, катализирующие удаление аминогруппы (NH2) из молекулы органического азотистого соединения.
Существуют 4 вида дезаминирования аминокислот, в основе которых лежат восстановительные реакции, гидролиз, внутримолекулярные структурные перестройки и окисление. Каждая из этих реакций протекает с участием соответствующей группы специфических ферментов. Однако, независимо от того, каким путем идет процесс дезаминирования, в конечном итоге NH2 аминокислоты всегда освобождается в виде NH3.
У микроорганизмов преобладающим является процесс окислительного дезаминирования, например:
Тест на дезаминирование фенилаланина применяют в дифференциальной диагностике энтеробактерий. Среди членов семейства Enterobacteriaceae только у Morganella spp., Proteus spp., Enterobacter agglomerans, Enterobacter sakazakii, Rahnella aquatilis и Tatumella ptyseos от 20 до 50% исследованных штаммов, принадлежащих к различным видам, способны дезаминировать фенилаланин. Среди грамотрицательных неферментирующих бактерий этим признаком обладает еще меньшее количество штаммов.
Тест основан на том, что микроорганизмы, вырабатывающие специфическую дезаминазу в отношении фенилаланина, при росте на питательных средах, содержащих L-фенилаланин, подвергают его окислительному дезаминированию. Конечными продуктами реакции являются циклические соединения фенилпировиноградной кислоты — фенилпируват и аммиак. Появление в среде фенилпирувата является прямым показателем дезаминирования фенилаланина. Для обнаружения его применяют качественную реакцию с хлоридом железа (III) (FeCl3). Фенилпируват, вступая в реакцию соединения с добавленным в среду хлоридом железа, образует фенилпируват железа, окрашивая среду в интенсивно зеленый цвет.
Техника постановки теста и учет результатов. Испытуемую 16-18-часовую культуру высевают густым штрихом на поверхность скошенной агаровой среды с фенилаланином. Посевы инкубируют в термостате при 35°-37°С в течение 24-48 ч. По истечении времени, необходимого для роста культуры и осуществления процесса дезаминирования фенилаланина, на поверхность среды с ростом культуры наносят 0,5 мл 10% хлорида железа, распределяя его по всей поверхности агара.
Положительный результат теста: через несколько минут после добавления раствора хлорида железа содержимое пробирки приобретает интенсивный зеленый цвет.
Отрицательный результат теста: цвет среды при добавлении раствора хлорида железа остается без изменений.
Некоторые виды микроорганизмов способны дезаминировать фенилаланин в первые же часы роста. Поэтому наряду с общепризнанной постановкой теста рекомендуется экспресс-метод.
Экспресс-метод определения дезаминирования фенилаланина. Готовят густую суспензию исследуемой культуры (примерно N2 по стандарту мутности Мак-Фарланда) в 0,5 мл забуференного раствора фенилаланина. Приготовленную взвесь инкубируют в термостате при 37 °С в течение 4 ч. По прошествии указанного времени к бактериальной взвеси добавляют 0,1 мл реактива хлорида железа (III) (FeCl3), и через 30 с после этого учитывают результаты реакции.
Положительный результат реакции проявляется окрашиванием взвеси в светло-зеленый цвет.
Положительный контроль: Proteus vulgaris.
Отрицательный контроль: Escherichia coli, Salmonella typhymurium.
- Читать далее "Тест на образование индола (тест на триптофаназу) в идентификации микроорганизмов"
Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 3.06.2019
- Тест на гидролиз гиппурата натрия в идентификации микроорганизмов
- Тест на бактериальные фосфатазы в идентификации микроорганизмов
- Тест на декарбоксилазы аминокислот в идентификации микроорганизмов
- Тест на дезаминирование фенилаланина в идентификации микроорганизмов
- Тест на образование индола (тест на триптофаназу) в идентификации микроорганизмов
- Тест на уреазу (тест на ферментативное расщепление мочевины)
- Тест на восстановление нитратов до нитритов (нитратредуктазный тест)
- Тест на дезоксирибонуклеазу (ДНКазу)
- Тест на протеолитическое разжижение желатина
- Тест на ферментативный гидролиз казеина