Тест на дезаминирование фенилаланина в идентификации микроорганизмов

Кроме декарбоксилаз в ферментативном расщеплении аминокислот могут принимать участие ферменты дезаминазы, катализирующие удаление аминогруппы (NH2) из молекулы органического азотистого соединения.

Существуют 4 вида дезаминирования аминокислот, в основе которых лежат восстановительные реакции, гидролиз, внутримолекулярные структурные перестройки и окисление. Каждая из этих реакций протекает с участием соответствующей группы специфических ферментов. Однако, независимо от того, каким путем идет процесс дезаминирования, в конечном итоге NH2 аминокислоты всегда освобождается в виде NH3.

У микроорганизмов преобладающим является процесс окислительного дезаминирования, например:

Тест на дезаминирование фенилаланина

Тест на дезаминирование фенилаланина применяют в дифференциальной диагностике энтеробактерий. Среди членов семейства Enterobacteriaceae только у Morganella spp., Proteus spp., Enterobacter agglomerans, Enterobacter sakazakii, Rahnella aquatilis и Tatumella ptyseos от 20 до 50% исследованных штаммов, принадлежащих к различным видам, способны дезаминировать фенилаланин. Среди грамотрицательных неферментирующих бактерий этим признаком обладает еще меньшее количество штаммов.

Тест основан на том, что микроорганизмы, вырабатывающие специфическую дезаминазу в отношении фенилаланина, при росте на питательных средах, содержащих L-фенилаланин, подвергают его окислительному дезаминированию. Конечными продуктами реакции являются циклические соединения фенилпировиноградной кислоты — фенилпируват и аммиак. Появление в среде фенилпирувата является прямым показателем дезаминирования фенилаланина. Для обнаружения его применяют качественную реакцию с хлоридом железа (III) (FeCl3). Фенилпируват, вступая в реакцию соединения с добавленным в среду хлоридом железа, образует фенилпируват железа, окрашивая среду в интенсивно зеленый цвет.

Техника постановки теста и учет результатов. Испытуемую 16-18-часовую культуру высевают густым штрихом на поверхность скошенной агаровой среды с фенилаланином. Посевы инкубируют в термостате при 35°-37°С в течение 24-48 ч. По истечении времени, необходимого для роста культуры и осуществления процесса дезаминирования фенилаланина, на поверхность среды с ростом культуры наносят 0,5 мл 10% хлорида железа, распределяя его по всей поверхности агара.

Положительный результат теста: через несколько минут после добавления раствора хлорида железа содержимое пробирки приобретает интенсивный зеленый цвет.

Отрицательный результат теста: цвет среды при добавлении раствора хлорида железа остается без изменений.

Некоторые виды микроорганизмов способны дезаминировать фенилаланин в первые же часы роста. Поэтому наряду с общепризнанной постановкой теста рекомендуется экспресс-метод.

Экспресс-метод определения дезаминирования фенилаланина. Готовят густую суспензию исследуемой культуры (примерно N2 по стандарту мутности Мак-Фарланда) в 0,5 мл забуференного раствора фенилаланина. Приготовленную взвесь инкубируют в термостате при 37 °С в течение 4 ч. По прошествии указанного времени к бактериальной взвеси добавляют 0,1 мл реактива хлорида железа (III) (FeCl3), и через 30 с после этого учитывают результаты реакции.

Положительный результат реакции проявляется окрашиванием взвеси в светло-зеленый цвет.

Положительный контроль: Proteus vulgaris.

Отрицательный контроль: Escherichia coli, Salmonella typhymurium.

- Читать далее "Тест на образование индола (тест на триптофаназу) в идентификации микроорганизмов"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 3.06.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.