Тест на уреазу предназначен для дифференциальной диагностики и идентификации бактерий, способных вызывать ферментативный гидролиз мочевины с образованием конечных продуктов ее расщепления — аммиака (NH₃) и диоксида углерода (СO₂).

Тест основан на том, что при гидролизе мочевины с образованием аммиака pH смещается в щелочную сторону, вызывая соответствующее изменение цвета индикатора в среде.

Техника постановки теста и учет результатов. Определение уреазы в испытуемых культурах может быть осуществлено двумя вариантами.

Вариант 1. Для обнаружения уреазы культуру исследуемого микроорганизма высевают на среду, содержащую мочевину. На скошенную поверхность среды Кристенсена или Преуса бактериальной петлей наносят зигзагообразный густой штрих из материала исследуемой колонии. Посев помещают в термостат при температуре 36(±1)°С на 18-24 ч.

При положительном результате реакции (расщепление мочевины на NH₃ и СO₂) происходит защелачивание среды со смещением pH в сторону его повышения. Соответственно изменению pH среды изменяется цвет индикатора. В среде Кристенсена с феноловым красным среда, имеющая желтоватый цвет, во время посева становится красной, а среда Преуса с бромтимоловым синим из оливковой превращается в синюю.

Вариант 2. Для быстрого получения результатов тест на уреазу ставят в жидкой среде Стелба. В пробирку с 2 мл среды вносят три бактериальные петли (диаметром 2 мм) 16-18-часовой исследуемой агаровой культуры. Суспензию тщательно гомогенизируют до получения однородной взвеси.

Засеянные пробирки инкубируют на водяной бане при 37 °С. Результаты реакции учитывают через 10 мин, через 1 и 2 ч. В течение этого времени среда Стэлба с индикатором феноловым красным при положительном результате теста приобретает малиново-красное окрашивание, при отрицательном результате сохраняет первоначальный желтый цвет.

- Читать далее "Тест на восстановление нитратов до нитритов (нитратредуктазный тест)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 3.06.2019