Тест на восстановление нитратов до нитритов (нитратредуктазный тест)

Под восстановлением нитратов в микробиологии подразумевают способность некоторых микроорганизмов продуцировать фермент нитратредуктазу, что позволяет использовать нитраты в целях утилизации азота, восстанавливая при этом соли азотной кислоты — нитраты (NO3) в соли азотистой кислоты — нитриты (NO2-).

При редукции нитратов до конечных продуктов реакции образуется аммиак и газообразный азот (N2), появление которого определяют по накоплению газа на дне «поплавков» (пробирок Durham) в жидкой среде с нитратом калия. Процесс редукции (денитрификации) нитратов может происходить в аэробных и анаэробных (за счет кислорода нитратов) условиях.

Редукция нитратов свойственна многим микроорганизмам, как грамположительным, так и грамотрицательным — псевдомонадам, энтеробактериям, нейссериям, некоторым клостридиям, бациллам и др.

Тест основан на выявлении нитритов в испытуемой культуре бактерий при помощи тест-реактива Грисса. Добавление реактива Грисса к среде, содержащей нитриты, вызывает окрашивание содержимого пробирки в красный цвет.

Техника постановки теста. Одну-две колонии культуры, испытуемой на образование нитратредуктазы, высевают на нитратный бульон с пробиркой Durham. Посев помещают в термостат при 35°С на 48 ч. Наблюдение за результатом реакции начинают с конца первых суток инкубации.

Из суточной бульонной культуры берут 1 мл бульона в агглютинационную пробирку и добавляют к нему 1-2 капли реактива Грисса. Появление красного окрашивания в течение нескольких ближайших минут свидетельствует о присутствии в среде нитратов и положительном результате теста. Наличие пузырьков газа в пробирке Durham указывает на то, что восстановление нитритов произошло до образования конечных продуктов (наличие азота).

При отсутствии окрашивания среды или получении сомнительных результатов инкубацию культуры продолжают, повторяя процедуру учета результатов через двое, трое и четверо суток.

Положительный контроль: Proteus vulgaris, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa.

Отрицательный контроль: Micrococcus luteus, Bacillus sphaericus.

- Читать далее "Тест на дезоксирибонуклеазу (ДНКазу)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 3.06.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.