Тест на образование индола (тест на триптофаназу) в идентификации микроорганизмов

Индол образуется из гетероциклической аминокислоты триптофана при утилизации его бактериями.

В клинико-микробиологических исследованиях образование индола используют, главным образом, для дифференциальной диагностики представителей семейства энтеробактерий.

Тест основан на том, что среда, содержащая аминокислоту триптофан, представляет собой питательную основу для размножения бактерий, образующих фермент триптофаназу. В процессе размножения микроорганизмов триптофан расщепляется, образуя индол, пировиноградную кислоту и аммиак.

Среда для индолообразования должна быть безуглеводной, не содержать нитратов, так как эти соединения подавляют образование триптофаназы. В качестве источника триптофана рекомендуется основа бульона Хоттингера, триптический или панкреатический перевар казеина. Кроме натуральных продуктов, богатых триптофаном, можно использовать 1% пептонную воду, обогащенную 0,1-0,3% раствором триптофана. Содержание индола в среде определяют добавлением бензойного альдегида (С6Н5СНО), реакция с которым ведет к образованию соединений розового или красного цвета.

а) Техника постановки теста. Неполную петлю испытуемой на индол культуры инокулируют в питательную среду с триптофаном. Посевы инкубируют 24-48 ч в термостате при температуре 35-37 °С. Тестирование культур на содержание индола может быть проверено двумя способами — с реактивами Ковача или Эрлиха.

б) Определение индола при помощи реактива Ковача. Испытуемую культуру в объеме 2 мл с соблюдением правил асептики переносят в стерильную пробирку и добавляют в нее примерно 0,5 мл реактива, после чего для перемешивания смеси пробирку слегка встряхивают.

При положительном результате реакции находящийся в среде индол вступает в реакцию с n-диметиламинбензальдегидом, придавая содержимому пробирки розовое или красное окрашивание. При отрицательном результате реакции цвет среды не изменяется.

в) Определение индола при помощи реактива Эрлиха. В 2-3 мл испытуемой культуры добавляют 1 мл ксилола. Пробирку с полученной смесью несколько раз интенсивно встряхивают для эстрагирования индола и помещают в термостат при температуре 36(±1)°С на 10 мин до образования на поверхности среды слоя ксилола. Затем, придав пробирке наклонное положение, но внутренней стенке тонкой струей вносят 0,5 мл реактива Эрлиха. При положительном результате реакции через несколько минут на границе бульона и ксилола появляется тонкое кольцо красного цвета.

Параллельно для контроля ставят аналогичную пробу с интактным бульоном.

Определение индола при помощи реактива Эрлиха более длительное и трудоемкое, чем с использованием реактива Ковача, но характеризуется большей чувствительностью.

г) Определение индола при помощи индикаторных полосок. До настоящего времени во многих микробиологических лабораториях для определения индола пользуются старым методом Мореля или Gillies. Под пробку в пробирку с испытуемой культурой, соблюдая правила асептики, подкладывают полоску сухой фильтровальной бумаги, пропитанной реактивом Gillies или насыщенным раствором щавелевой кислоты по Морелю. Верхний конец индикаторной бумаги надежно фиксируют пробкой, нижний конец не должен соприкасаться со средой, на всем протяжении полоска индикаторной бумаги прилегает к стенке пробирки.

При образовании индола в культуре (положительная реакция) нижний конец индикаторной полоски вне зависимости от индикатора, которым она была обработана, приобретает более или менее интенсивный розовый цвет. При отрицательной реакции (отсутствие индола в среде) кремово-желтый цвет бумаги не изменяется.

Положительный контроль: Proteus vulgaris.

Отрицательный контроль: Salmonella typhimurium, Enterobacter aerogenes.

- Читать далее "Тест на уреазу (тест на ферментативное расщепление мочевины)"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 3.06.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.