Некоторые виды микроорганизмов синтезируют протеолитические ферменты — протеиназы, катализирующие гидролиз белков. Для выявления протеолитических ферментов испытуемые микроорганизмы выращивают на питательных средах, в состав которых входит белковый субстрат — желатин, казеиноген, кусочки коагулированного яичного белка или мяса. Вследствие специфичности ферментов протеолитическая активность одного и того же микроорганизма на питательных средах с разными белковыми субстратами проявляется неодинаково, поэтому для дифференциальной диагностики и идентификации разных видов микроорганизмов рекомендуют питательные среды с различными белковыми субстратами.

Тест на протеолитическое разжижение желатина. Желатин — смесь белковых субстратов животного происхождения, получаемых путем выпаривания костей, хрящей, сухожилий млекопитающих или хрящей и плавательных пузырей рыб. Желатин — коллоид, в теплой воде набухает и растворяется, при низкой температуре превращается в гель.

В микробиологии тест на протеолиз желатина используется для дифференциальной диагностики и идентификации некоторых патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Тест основан на необратимом полном или частичном разжижении желатина иод воздействием микробных протеаз.

Техника постановки теста. Столбик питательного желатина засевают уколом до дна пробирки испытуемой 16-18-часовой культурой. Посевы инкубируют в термостате при 36(±1)°С. Некоторые виды микроорганизмов, требующие для своего роста более низкой температуры, выращивают при температуре 22-30 °С. При инкубации посевов параллельно с опытными ставят контрольные пробирки с незасеянными средами.

Учет результатов. Просмотр посевов и учет результатов реакции начинают проводить через 24 ч от начала постановки реакции. Для некоторых видов реакции срок инкубации увеличивается до 14 сут.

При температуре 36(±1)°С желатин плавится, поэтому при учете результатов опытные и контрольные пробирки на 30-60 мин ставят в холодильник или помещают в холодную воду при температуре +4-6 °С.

При положительном результате теста среда при охлаждении в опытных пробирках остается жидкой, а в контрольных — студнеобразной.

При отрицательном результате среда и в опытных, и в контрольных пробирках — студнеобразная.

Положительный контроль: Proteus mirabilis.

Отрицательный контроль: Escherichia coli.

- Читать далее "Тест на ферментативный гидролиз казеина"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 3.06.2019