Дезоксирибонуклеаза, или ДНКаза, — фермент, вызывающий деполимеризацию ДНК. Его продуцируют многие микроорганизмы: Staphylococcus aureus, Serratia marcescens, Moraxella catarrhalis и др. Характерно, что продуцирование ДНКазы вирулентными штаммами S. aureus коррелирует с образованием плазмокоагулазы.

Тест на ДНКазу применяется для дифференциальной диагностики и идентификации перечисленных выше и некоторых других микроорганизмов.

Техника постановки теста:

1. На подсушенную поверхность специальной для теста на ДНКазу среды высевают испытуемую 18-часовую микробную культуру. Посев осуществляют при помощи штамма-репликатора бляшками или штрихом с образованием изолированных колоний. Посевы инкубируют при температуре 36(±1)°С. Через 20-24 ч учитывают результат реакции.

При учете результатов в чашку Петри с культурой вносят 5 мл 0,1 N HCl на 3-5 мин и затем сливают. И на фоне среды, мутной от осадка, образовавшегося в результате взаимодействия высокомолекулярной ДНК с хлоридом натрия (NaCl), появляются прозрачные зоны деполимеризованной ДНК, связанные с ферментативным действием микробной ДНКазы. При положительном результате реакции прозрачная зона должна не менее чем в 4-5 раз превышать диаметр колонии, которую она окружает. Зона меньшего размера расценивается как отрицательный результат реакции.

2. Для постановки теста на ДНКазу можно пользоваться средой с раствором метиленового синего.

Посев испытуемых культур проводят бляшками диаметром 3-4 мм. Засеянные чашки помещают в термостат при 36(±1) °С на 20-24 ч.

В результате деполимеризации ДНК под действием ДНКазы после нанесения на поверхность инкубированной культуры раствора соляной кислоты вокруг колоний образуются прозрачные бесцветные зоны на общем светло-синем фоне среды. Зоны просветления среды вокруг ДНКазоположительных колоний измеряют от края колоний до конца зоны просветления. Вокруг колоний S. aureus отмечается дополнительный признак — фиолетовый диск.

Положительным результатом реакции считают зону среды, равную 5 мм и более. Зоны просветления меньшей ширины расценивают как отрицательную или сомнительную реакцию.

Положительный контроль: Staphylococcus aureus, Serratia marcescens, Streptococcus pyogenes.

Отрицательный контроль: Staphylococcus epidermidis, Enterobacter aerogenes.

- Читать далее "Тест на протеолитическое разжижение желатина"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 3.06.2019