Современные стандартизованные методы оценки антибиотикочувствительности подразделяют на методы серийных разведений и диффузионные.

Методы серийных разведений основаны на прямом определении основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибиотика, — величины минимальной подавляющей концентрации (МПК), точнее — минимальной концентрации, подавляющей видимый рост исследуемого микроорганизма.

Для определения МПК заданные концентрации антибиотика вносят в питательную среду, которую затем засевают культурой исследуемого микроорганизма и после инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста. Из принципиальных факторов, ограничивающих точность методов серийных разведений МПК, следует отметить дискретность используемых концентраций антибиотиков.

При проведении традиционного метода двукратных разведений МПК фиксируемая экспериментатором не соответствует истинной величине этого показателя. Истинная величина МПК будет находиться в промежутке между зафиксированной экспериментатором и концентрацией, в 2 раза ей уступающей и не вызвавшей ингибиции видимого роста.

В зависимости от используемой питательной среды различают методы серийных разведений в агаре и в бульоне, а в зависимости от объема используемой жидкой питательной среды — методы серийных макро- и микроразведений.

Разновидностью метода серийных разведений является метод, основанный на использовании только двух концентраций антибиотиков, соответствующих пороговым или пограничным (break-points). Эти концентрации отделяют «чувствительные» микроорганизмы от «промежуточных» и «промежуточные» — от «резистентных». Метод обеспечивает получение качественных результатов, позволяющих отнести исследуемый микроорганизм к определенной категории чувствительности.

Диффузионные методы оценки антибиотикочувствительности основаны на диффузии антибиотиков из носителя в плотную питательную среду и ингибиции роста исследуемой культуры в той зоне, где концентрация антибиотика превосходит МПК. В настоящее время существуют две основные модификации диффузионного метода: диско-диффузионный и эпсилометрический (Е-тест).

Диско-диффузионный метод основан на регистрации диаметра зоны ингибиции роста исследуемого микроорганизма вокруг круглого носителя антибиотика (бумажного диска).

Образование зоны ингибиции роста происходит в результате диффузии антибиотика из носителя в питательную среду. В определенных пределах диаметр зоны ингибиции роста жестко связан с величиной МПК. Диско-диффузионный метод позволяет лишь косвенно судить о МПК. Основным результатом является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности.

При эпсилометрическом методе в качестве носителя используется узкая полоска полимера (0,5x0,6 см), пропитанная антибиотиком в различных концентрациях (от минимальной до максимальной). Ингибиция роста микроорганизма вокруг полоски носителя происходит только в той зоне, где концентрация антибиотика, диффундирующего из носителя, выше МПК. Результатом диффузии антибиотика в питательную среду является образование вокруг носителя каплевидной зоны ингибиции роста.

Концентрации антибиотика в каждом участке носителя типографским способом нанесены на соответствующем отрезке наружной (обращенной к исследователю) поверхности носителя. МПК учитывают в том месте, где граница зоны ингибиции роста вплотную подходит к носителю. Детальные инструкции по проведению Е-теста прилагаются изготовителем к набору реактивов, поэтому детали метода рассматривать не имеет смысла.

Основными параметрами, влияющими на выбор метода оценки антибиотико-чувствительности, являются:
— точность;
— воспроизводимость;
— трудоемкость;
— стоимость.

Проведение исследований по оценке антибиотикочувствительности включает следующие этапы:
— приготовление суспензии исследуемых микроорганизмов (инокулята);
— приготовление питательных сред;
— инокуляция;
— инкубация;
— учет результатов.

- Читать далее "Приготовление суспензии микроорганизмов для исследования чувствительности к антибиотикам"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.06.2019