Для приготовления суспензии используют суточную бульонную или агаровую культуру исследуемых микроорганизмов.

Для получения бульонной культуры отбирают одну или несколько четко изолированных колоний, легким прикосновением петли к центру колонии переносят незначительное количество материала в пробирку с 4-5 мл жидкой неселективной среды, например МПБ. Инкубируют при 37 °С. Приблизительно через 5-6 ч инкубации мутность суспензии соответствует 0,5 стандарта Мак-Фарланда (1-2х10⁸ КОЕ/мл).

Концентрация доводится точно до 0,5 стандарта Мак-Фарланда при помощи спектрофотометра (денситометра) или под визуальным контролем путем добавления стерильного изотонического раствора. Использование бульонной культуры для получения инокулята возможно лишь при исследовании чувствительности быстрорастущих бактерий с обычными питательными потребностями.

Для приготовления суспензии из агаровых культур можно использовать только четко изолированные колонии, выросшие на неселективных питательных средах. Суспензии по стандарту Мак-Фарланда готовят на стерильном изотоническом растворе или бульонной среде.

Стандарт Мак-Фарланда приобретается у коммерческих поставщиков или готовится в лаборатории.

Приготовление стандарта 0,5 Мак-Фарланда:

• К 0,5 мл раствора BaCl₂ в концентрации 0,048 моль/л (1,175% раствор BaCl₂ * 2Н₂O) медленно при тщательном перемешивании добавляют 99,5 мл раствора H₂SO₄ в концентрации 0,18 моль/л (1%) до получения гомогенной суспензии.

• Правильность приготовления суспензии необходимо проверить спектрофотометрически. Поглощение при использовании кюветы 1 см должно составить 0,08-0,1 при длине волны 625 нм.

• Полученную суспензию разливают в пробирки с герметично закрывающимися крышками. Пробирки должны быть такого же диаметра, как и используемые для приготовления бактериальной суспензии.

• Хранить пробирки с суспензией необходимо в темноте при комнатной температуре.

• Перед использованием пробирки нужно тщательно встряхивать и оценивать однородность суспензии. При появлении видимых частиц пробирки изымаются из употребления.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 13.06.2019