Трудности (минусы) ПЦР

а) Чувствительность. Высокая чувствительность ПЦР является в некотором роде отрицательным качеством данного метода. Присутствие даже следового количества случайно занесенной ДНК (или ее ПЦР-фрагмента) в исходных компонентах реакционной смеси (называемое контаминацией) может привести к получению ложноположительных результатов. Для исключения контаминаций необходимо строго соблюдать принципы работы в ПЦР-лаборатории. Основные правила работы в ПЦР-лаборатории перечислены выше.

б) Трудности в различении живого и неживого инфекционного агента. ПЦР позволяет ответить на вопрос, есть ли в пробе ДНК или РНК данного инфекционного агента. Однако при помощи ПЦР нельзя определить, живой или неживой патогенный микроорганизм присутствует в пробе. Если ответ на данный вопрос важен (в зависимости от течения заболевания), необходимы дополнительные методы для уточнения диагноза, например, мониторинг экспрессии генов бактерии.

Критерием того, что бактерия живет и размножается является экспрессия генов и синтез важных для жизни бактерии белков. Экспрессию генов можно определить по наличию мРНК микобактерий. Поскольку время жизни бактериальной мРНК очень короткое (1-2 мин), определение ее возможно только при постоянной экспрессии генов бактерии. Один из методов, позволяющий определить наличие мРНК, — это ОТ/ПЦР, которая позволяет определять мРНК (а не только ДНК) бактерий. Результаты ОТ/ПЦР могут дополнять результаты ПЦР в тех случаях, когда интерпретация результатов затруднена.

Как уже говорилось выше, ПЦР является довольно удобным методом диагностики микобактерий; он сочетает в себе высокую чувствительность, специфичность и быстроту. Так, при острой инфекции наличие ДНК микобактерий может указывать на бактеримию. После курса химиотерапии могут оставаться нежизнеспособные и неинфекционные особи. Наличие ДНК микобактерий в организме не дает информации о результате лечения. Только при исследовании мРНК возможно определить, на какой стадии находится заболевание.

Наличие ДНК и мРНК указывает на то, что микобактерии жизнеспособны, идет постоянная экспрессия генов и синтез белка. Наличие ДНК без мРНК говорит о наличии некоторого количества нежизнеспособных бактерий (или ДНК микобактерий). При проведении химиотерапии необходимы промежуточные исследования, позволяющие судить об эффективности лечения. Сейчас такие исследования проводятся бактериологическими методами, которые требуют довольно длительного (2-3 мес.) времени, что не всегда способствует эффективному лечению. Проведение комплексного исследования экспрессии нескольких генов микобактерий молекулярными методами может помочь проведению мониторинга лечения туберкулеза.

- Вернуться в оглавление раздела "Медицинская микробиология"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 28.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.