После предварительной подготовки образцы переносят в полипропиленовые пластиковые пробирки типа «Эппендорф» емкостью 1,5 мл. Пробирки маркируют и из каждой выделяют нуклеиновые кислоты.

ДНК и РНК можно выделять из различных биологических образцов (крови, мочи, мокроты, костной ткани, биопсийного материала и даже из одного волоса). С этой целью используют различные коммерческие наборы реагентов для выделения нуклеиновых кислот, а также специальные наборы, которые входят в состав тест-систем. Можно и самостоятельно выбрать метод выделения ДНК или РНК для анализа и приготовить для этого реагенты.

Выделить нуклеиновые кислоты (ДНК или РНК) — значит получить их в чистом виде, т. е. отделить от белков и других клеточных молекул, которые могут помешать молекулярному анализу. При работе с культурами клеток можно использовать более простые методы выделения, при этом выход нуклеиновых кислот увеличивается пропорционально объему культуры.

Необходимо помнить, что кроме бактериальной ДНК или мРНК, в клетке находятся другие ДНК и РНК, которые входят в состав клетки-хозяина. Так, типичная диплоидная клетка человека в норме содержит примерно 7 пг геномной ДНК и некоторое количество митохондриальной. Таким образом, суммарный продукт, выделяемый из клинических образцов, представляет собой смесь геномной и митохондриальной ДНК. В большинстве случаев ПЦР можно проводить на суммарной ДНК, поскольку митохондриальная ДНК обычно не мешает анализу.

Типичная клетка млекопитающих содержит около 15 пг РНК. Из них 80-85% приходится на долю рибосомной (28S, 18S и 5S) РНК, а остальная часть представлена в основном низкомолекулярными РНК (транспортными и малыми ядерными). И лишь 1-5% суммарной РНК составляет информационная РНК (мРНК), гетерогенная как по размеру, так и по первичной структуре. Для клинического анализа можно выделять и суммарную РНК.

Ниже описано несколько методов выделения ДНК и РНК из патогенных микроорганизмов, которые применяются в практической диагностике. Выбор конкретного метода зависит от целей эксперимента и того инфекционного агента, который необходимо определить.

- Читать далее "Техника выделения ДНК для ПЦР"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 28.08.2019