Требования предъявляемые для ПЦР-лаборатории и необходимое оборудование

Для успешного проведения анализов с использованием ПЦР как лабораторного метода диагностики требуется определенное устройство лаборатории. Одно из важнейших условий — распределение рабочих мест по трем помещениям (комнатам): для выделения нуклеиновых кислот, для постановки ПЦР и для проведения электрофореза. В каждой комнате должен быть отдельный набор одежды для оператора. Одежда не переносится из комнаты в комнату, а оператор ПЦР перед тем как войти в комнату должен переодеться. Удобно для каждой комнаты иметь одежду своего цвета, но это требование не обязательное.

Эти требования обусловлены высокой чувствительностью ПЦР и возможностью загрязнения молекулами ДНК (контаминация) исследуемых образцов и компонентов тест-системы.

Первая комната предназначена для выделения ДНК или РНК из биологического материала. В эту комнату попадают образцы крови и другие биологические образцы, клеточные культуры. В комнате необходимо иметь отдельный набор автоматических микропипеток (20-200 и 200-1000 мкл), набор штативов. Для выделения нуклеиновых кислот лучше использовать ламинарный шкаф с системой защиты оператора. Для этой цели подходит также вытяжной шкаф или бокс, который можно вымыть и продезинфицировать. В комнате обязательно должен быть переносной или стационарный источник УФ-излучения (УФ-лампа) для обработки помещения после каждого выделения нуклеиновых кислот. Для выделения ДНК и РНК из образцов необходимы микроцентрифуга и твердотельный программируемый термостат. Желательно иметь встряхиватель типа «Vortex». При обработке большого числа образцов удобно пользоваться вакуумным насосом для отсасывания надосадочной жидкости при выделении ДНК или РНК из образцов. Целесообразно в этой комнате поставить холодильник для хранения биологических образцов и культур.

Требования предъявляемые для ПЦР-лаборатории и необходимое оборудование

Вторая комната предназначена для приготовления реакционных смесей для ПЦР из чистых компонентов. В эту комнату не должны попадать ни исходные биологические образцы, ни выделенные нуклеиновые кислоты, ни тем более продукты ПЦР. Реактивы смешивают в ПЦР-боксе или в ламинарном шкафу. В ПЦР-бокс (вторую комнату) никаких образцов, содержащих ДНК или РНК, вносить нельзя. В этой комнате защита оператору не нужна, так как здесь нет инфекционного материала. Необходим набор автоматических микропипеток (1-20 и 20-200 мкл) для работы с чистыми реактивами и набор штативов. Пробирки после проведения ПЦР открывать в этой комнате строго воспрещается! Во второй комнате целесообразно поставить холодильник для чистых реактивов, компонентов тест-систем. В этот холодильник не должны попадать образцы ДНК или РНК, культур или биологических жидкостей.

Третья комната предназначена для детекции продуктов ПЦР. В этой комнате должен быть источник тока и камера для проведения горизонтального электрофореза в агарозном геле. Кроме того, здесь необходим УФ-трансиллюминатор для оценки результатов ПЦР. Для нанесения образцов на электрофорез необходима отдельная автоматическая микропипетка (0-20 мкл). Данная пипетка не должна использоваться для выделения или приготовления каких-либо смесей для ПЦР. В третьей комнате должен быть свой набор штативов; рекомендуется поставить амплификатор. Необходимо помнить, что в этой комнате открывают пробирки после проведения ПЦР. По окончании ПЦР концентрация ДНК в миллионы раз превышает исходную (которая была получена в комнате для выделения). Следовательно, эти образцы могут быть потенциальными источниками контаминаций.

Матрицу в реакционную смесь нужно вносить в первой комнате (для выделения ДНК или РНК). Нанесение матрицы рекомендуется производить специальными наконечниками с фильтрами для автоматических пипеток. Для внесения матрицы необходимо иметь отдельную автоматическую микропипетку (0-20 мкл) или микродозатор.

На рисунке ниже представлен набор оборудования, необходимого для проведения ПЦР.

- Читать далее "Техника постановки ПЦР: взятие клинического материала"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 28.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.