Преимущества (плюсы) ПЦР

а) Чувствительность. Чувствительность данного метода достигает 10-15 г (что составляет несколько копий инфекционного агента на пробу объемом 0,2 мл). Благодаря высокой чувствительности ПЦР позволяет определять возбудителя заболевания на ранних стадиях, когда выявление инфекционного агента другими методами невозможно. Например, ДНК патогенных лептоспир можно выявить на столь ранних стадиях заболевания, когда антитела не могут быть зарегистрированы. Использование Г1ЦР для детекции патогенных лептоспир позволяет выявить возбудитель заболевания на вторые сутки после заражения.

Наличие антител в крови не всегда является показателем заболевания, так как их появление может быть обусловлено кратковременным контактом с возбудителем и не сопровождаться манифестной формой инфекции. Нахождение же ДНК или РНК возбудителя указывает на его наличие, а следовательно, на персистирование данного микроба в организме.

Часто возбудитель заболевания замаскирован, например, в связи с агрегацией с клеточными структурами или связыванием с антителами. В таких случаях ПЦР незаменима как средство обнаружения инфекционного агента.

Преимущество ПЦР перед культуральными методами исследования состоит в том, что чувствительности этих методов бывает недостаточно для прямой идентификации микроорганизмов в таких сложных клинических образцах, как кровь или моча. Определить инфекционный агент в данных образцах позволяет ПЦР, обладающая высочайшей чувствительностью.

б) Специфичность. Специфичность ПЦР обеспечивается подбором специфических компонентов реакции и условий ее проведения. При создании тест-системы проводится сравнение первичных структур большого числа микроорганизмов. Затем подбираются специфические праймеры на определенные участки ДНК или РНК, которые принадлежат только исследуемому инфекционному агенту. Таким образом, удается добиться, чтобы данная тест-система могла определять только строго определенный инфекционный агент (или группу инфекционных агентов), вызывающих данное заболевание.

Если стоит задача создания «видовой тест-системы» для диагностики (т. е. необходимо выявлять определенный вид микроорганизма и отличать его от всех других видов), то праймеры подбирают на строго специфичный для данного вида участок ДНК или РНК. Например, существуют тест-системы ПЦР для определения патогенных лептоспир L. Interrogans. При этом непатогенные лептоспиры-сапрофиты L. biflexa дают отрицательный результат ПЦР. Если стоит задача создания «родовой тест-системы» (т. е. необходимо определять группу родственных патогенов), то праймеры подбираются на участок ДНК или РНК, присутствующий во всех микроорганизмах этой группы. Микроорганизмы другого рода дадут отрицательные результаты при использовании данных праймеров. При выборе праймеров обязательна проверка на перекрестные реакции, т. е. необходимо проверить, не будет ли получен ложноположительный ответ при проведении реакции с другими микроорганизмами или клеточными культурами. Такая проверка осуществляется при помощи компьютерных программ и на практике с использованием ряда референтных штаммов.

в) Возможность дифференциальной видовой диагностики. ПЦР позволяет проводить видовую диагностику различных заболеваний. Такая диагностика требуется, когда известно несколько видов возбудителя, и различные виды варьируют по своей патогенности. Так, например, известно более 70 видов микобактерий, которые в большинстве своем не патогенны для человека и животных. Из них наиболее опасны М. bovis и М. tuberculosis. Однако классические методы диагностики не всегда позволяют достоверно и быстро определить видовую принадлежность штамма микобактерий.

Для того чтобы поставить диагноз при помощи классических методов (культивирование на питательных средах) требуется 2-3 мес. Кроме того, некоторые штаммы трудно культивируются, поэтому не всегда можно поставить однозначный диагноз даже после бактериологического исследования. Методом ПЦР дифференциация видов осуществляется в течение 1-2 дней. Вторым примером может служить определение патогенного штамма В. Anthracis. Наряду с патогенным видом, вызывающим сибирскую язву, существуют так называемые атипичные виды, которые не представляют опасности для человека и животных. Методом ПЦР можно достоверно отличить эти виды и определить, когда возникает реальная угроза заболевания.

г) Возможность быстрой диагностики возбудителя. До недавнего времени диагностика некоторых возбудителей проводилась в течение длительного времени. Это связанно с особенностями роста и культивирования микроорганизмов. Некоторые микроорганизмы растут очень медленно. Для их определения бактериологическими методами либо путем биопробы на животных требуется несколько месяцев. Кроме того, в процессе культивирования могут возникнуть трудности, связанные с особенностями роста микроорганизмов, а также с его ингибированием различными компонентами сред. К таким возбудителям относятся М. bovis и М. tuberculosis. Время обнаружения некоторых возбудителей методом ПЦР по сравнению с микробиологическим исследованием может сокращаться в 10-20 раз.

- Читать далее "Трудности (минусы) ПЦР"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 28.08.2019

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.