Окраска материала флюоресцирующими моноклональными антителами для диагностики хламидий

Для окраски используют коммерческие наборы «ХламоноСкрин», предназначенные для выявления группоспецифического антигена (ЛПС) хламидий, и «Хламо-ноСкрин-2» для выявления видоспецифического белка МОМР С. trachomatis в клиническом материале (НИАРМЕДИК плюс).

Состав набора:
— лиофилизированные, меченные ФИТЦ моноклональные антитела;
— растворитель для антител;
— монтирующая жидкость;
— фосфатно-солевой буфер (ФСБ) (навеска солей);
— фиксирующая жидкость;
— предметные стекла с лунками.

На фиксированный холодным ацетоном (+4°С) соскоб наносят 40-50 мкл раствора антихламидийных антител (АТ) в рабочем разведении в смеси с контрастирующим реагентом (синька Эванса в конечном разведении 1:10 000), полностью покрывая восьмимиллиметровую лунку предметного стекла. Препарат помещают во влажную камеру (+37°С) на 25 мин, не допуская подсыхания нанесенного раствора АТ.

После инкубации раствор меченых моноклональных АТ смывают ФСБ (pH 7,2-7,4) и помещают в дезинфицирующий раствор. Затем соскоб промывают 2 раза по 5 мин ФСБ на магнитной мешалке со сменой буфера.

После отмывки препарат полностью высушивают на воздухе при комнатной температуре. На высушенный препарат наносят каплю монтирующей жидкости (забуференный глицерин: 9 частей глицерина и одна часть ФСБ, pH 7,2-7,4), лунку покрывают обезжиренным покровным стеклом. Лишнюю монтирующую жидкость и образовавшиеся пузырьки воздуха удаляют фильтровальной бумагой.

Просмотр препарата осуществляют сразу после окраски. Допускается просмотр через 16-18 ч после окраски.

Препараты исследуют в люминесцентном микроскопе с системой фильтров, обеспечивавших возбуждающий свет с длиной волны 390 нм (для микроскопа РПО-11 с системой светофильтров СЗС 24, БС 8-3, с зеленой боковой пластиной). Оптимальное увеличение (окуляр х6,3, объектив для масляной иммерсии х100). При микроскопии используют специальное нефлюоресцирующее масло.

При люминесцентной микроскопии хламидии выявляют либо в виде характерных цитоплазматических включений (обнаруживают редко), окрашенных в зеленый цвет, либо внеклеточно — в виде отдельных ярко-зеленых ЭТ и РТ. Первые под люминесцентным микроскопом выглядят как булавочный прокол ярко-зеленого цвета, РТ — в 2-4 раза крупнее.

Результат считают положительным, если во всем препарате внеклеточно определяют 3-10 и более ярко-зеленых ЭТ (в виде точки) или РТ (в виде точки или овала), или внутри клеток даже одно типичное цитоплазматическое включение хламидий изумрудного цвета.

Результат считают отрицательным, если при наличии в соскобе не менее 50 эпителиальных клеток не выявляют хламидийные тельца.

В случае выявления менее 10 телец хламидий и/или отсутствия (либо малого количества) эпителиальных клеток в соскобе необходимо повторить исследование.

- Читать далее "Культуральный метод диагностики хламидий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 12.2.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.