Приготовление и окраска препаратов для цитологического исследования на хламидии

1. Окраска по Романовскому-Гимзе. Материалом для цитологического исследования при урогенитальных инфекциях служит соскоб со слизистых оболочек уретры у мужчин, цервикального канала, шейки матки, уретры — у женщин; при окулогенитальной инфекции к этому добавляются при признаках конъюнктивита у новорожденных — соскобы с конъюнктивы.

Значительно реже объектом исследования являются соскобы слизистой респираторного тракта от больных с подозрением на хламидийную природу заболевания верхних дыхательных путей.

Исследуемый материал распределяют тонким равномерным слоем в лунке обезжиренного предметного стекла, подсушивают на воздухе, затем фиксируют 10 мин смесью Никифорова (этиловый спирт + эфир в соотношении 1:1). После фиксации окрашивают коммерческим красителем Романовского-Гимзы, разведенным бидистиллированной или свежепрокипяченной охлажденной до комнатной температуры дистиллированной водой.

Препараты красят свежеприготовленным рабочим раствором 30-45 мин в вертикальном положении во избежание адсорбции краски на стекле. Окрашенный препарат промывают водой, дифференцируют под визуальным контролем (5-10 с) подкисленным этанолом (3-5 капель ледяной уксусной кислоты на 15-20 мл спирта) или смесью абсолютного этанола и гвоздичного масла (10:1), вновь промывают, подсушивают на воздухе и изучают в световом микроскопе.

Препараты для общей оценки предварительно просматривают при большом увеличении микроскопа (об. х40, ок. х6,3) и затем исследуют при масляной иммерсии (об. х100, ок. х6,3).

Учитывая качественные отличия красителей, оптимальную концентрацию свежеприготовленного рабочего раствора следует подбирать опытным путем по окраске ядер (красные зерна хроматина), цитоплазмы и ядрышек (светло-голубые) эпителиальных клеток.

Просмотр одного препарата требует 30-40 мин. Окраска по Романовскому-Гимзе является классическим методом диагностики хламидиозов. Цитоплазматические включения хламидий представляют собой компактные или структурно рыхлые массы возбудителя на разных этапах его размножения, в большинстве своем расположенные вблизи ядра клетки.

Ранние включения, содержащие преимущественно РТ со средним диаметром 0,5-1,2 мкм, имеют сине-фиолетовый цвет, а зрелые крупные включения, содержащие преимущественно мелкие зрелые морфологические структуры — ЭТ, — розовато-красный.

При просмотре препарата необходимо учитывать возможность обнаружения псевдовключений: клеточных структур и бактерий, напоминающих хламидии.

2. Окраска раствором Люголя. При диагностике некоторых форм хламидийной инфекции экстрагенитальной локализации, например, офтальмохламидиоза, цитоплазматические включения хламидий можно выявить при помощи раствора Люголя, окрашивающего полисахаридный компонент включений, накапливающийся на поздних этапах размножения только штаммов С. trachomatis. Включения окрашиваются в красно-коричневый цвет на фоне светло-желтой клетки. Процедура окраски очень проста: на фиксированный препарат наносят коммерческий раствор Люголя на 5 мин.

По истечении этого времени избыток краски удаляют фильтровальной бумагой, мазок просветляют в ксилоле 10-20 с. Однако вследствие значительного содержания гликогена в клетках эпителия слизистой оболочки мочеполовых путей для диагностики урогенитальной хламидийной инфекции этот метод оказался непригодным.

- Читать далее "Окраска материала флюоресцирующими моноклональными антителами для диагностики хламидий"

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 12.2.2020

Остались вопросы или замечания?

Все размещенные статьи преследуют образовательную цель и предназначены для лиц имеющих базовые знания в области медицины.
Без консультации лечащего врача нельзя применять на практике любой изложенный в статье факт.
Жалобы и возникшие вопросы просим присылать на адрес statii@dommedika.com
На этот же адрес ждем запросы на координаты авторов статей - быстро их предоставим.